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紫外分光光度法
产品内容：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体47.5 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存；
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；
试剂四：液体×1 支，-20℃保存；
产品说明：
葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
G6P 催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH，在340nm下测定NADH生成速率，即可反映G6P 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本的前处理：
1、 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、 血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：
1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
工作液的配制：临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合待用；用不完的试剂4℃保存一周；
2、 将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）预热5分钟。
3、 在1mL 石英比色皿中加入50μL 样本和950μL 工作液，立即混匀，记录340nm 处初始吸光值A1 和 2min 后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
注意：在该试剂盒中，若ΔA 大于0.3，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使ΔA 小于0.3 可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
