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二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）测试盒
点击次数：196发布时间：2019/12/13 10:43:36
更新日期：2024/8/8 17:56:42
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
紫外分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
核酮糖-1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶（EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一个关键酶，既控制着CO2的固定，同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流，其活性的大小直接影响着光合速率。
测定原理：
在 Rubisco 的催化下，1分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）与1分子的 CO2结合，产生 2分子的3-磷酸甘油酸（PGA），PGA 可通过外加的 3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，并使还原型辅酶 I（NADH）氧化。因此，340nm吸光度的变化可计算还原型辅酶 I 氧化速率，还原型辅酶 I 氧化速率可反应 Rubisco 的活性。
需自备的仪器和用品：
可见-紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：25mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：25mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 875uL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存一周；
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 875uL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存一周；
粗酶液制备 ：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：临用前在试剂二中加入 22.5mL 试剂一，充分混匀，在 25℃孵育 5min；
现配现用；
3、测定：在 1mL 石英比色皿中依次加入 30uL 样本、35uL 试剂三、35uL 试剂四和 900uL
工作液，混匀；记录340nm处20 s时吸光值A1和2 min 20 s时的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
