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焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶（PFP）测试盒
点击次数：149发布时间：2019/12/13 10:44:54
更新日期：2024/8/8 17:56:42
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
（Pyrophosphate: fructose-6–
phosphate-1-phosphoric acid transferase ，PFP ）试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶（PFP，EC2.7.1.90）是一种胞质酶，广泛存在于植物组织中，催化果糖-6-磷酸与果糖-1,6-二磷酸之间的可逆转化，在光合作用碳代谢中起重要作用。
测定原理
PFP 催化 6-磷酸果糖转化为 1,6-二磷酸果糖，它在醛缩酶和磷酸丙糖异构酶的作用下转变为3-磷酸甘油醛，再由 3-磷酸甘油醛脱氢酶和 NADH 催化生成 3-磷酸甘油酸、NAD 和磷酸，340nm 处的吸光度变化反映了PFP的活性的高低。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿。
试剂组成和配制
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解。
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解。
试剂四：液体 0.5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂五：液体 0.5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂六：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
酶液提取
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g 离心10min，取上清置冰上待测。
3. 液体：直接检测。
测定操作
1. 分光光度计预热 30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2. 取1mL石英比色皿，依次加入580μL试剂一，100μL试剂二，100μL试剂三，10μL试剂四，10μL试剂五，100μL试剂六，100μL粗酶液，充分混匀，记录340nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2，△A=A1-A2
