二氧化碳培养箱的正面有操作盘，盘上设有电源开关，温度调节器（手动式和液晶显示盘），CO2注入开关，CO2调节旋扭，湿度调节旋扭，温度显示盘，CO2显示盘和湿度显示盘，二氧化碳样品孔（用于抽取箱内的样品，以检测箱内的CO2是否达到显示盘上所显示的含量）和报警装置（超温报警灯）
（1）二氧化碳培养箱应放置于位置比较平稳，并远离热源的地方，以防止温度波动和微生物的污染。
（2）在接通电源前，应按照使用说明书，在二氧化碳培养箱内加入一定的蒸馏水（所加入的水加入一定量的消毒剂，详见说明书），以免烧坏机器。
（3）当水加到一定量后，报警灯亮，即停止加水，打开电源开关，即开始加温，将温度控制器调到所需温度。
（4）当温度达到所需温度时，则自动停止加热，超过所需温度时，超温报警灯亮，并发出报警声。
（5）二氧化碳培养箱所用的CO2可以用液态CO2或气体，无论用哪种CO2给供的管子不能太变曲，以保证气体的畅通。一般选用CO2钢瓶，接上压力控制表即可。
（6）CO2含量的调零在箱内温度和湿度稳定后（一般须三天），旋动CO2调节旋扭，使显示盘的数字调到
0.00，过5分钟后如需要再重复调整，直到显示盘上的读数稳定为止。打开CO2注入开关（注入灯亮），将CO2设定值调到所需浓度，使浓度达到设定值浓度后（注入灯熄灭），并至少维持10分钟。此后则由CO2控制器自动调节箱内的CO2含量。
（7）二氧化碳培养箱湿度的调整先将湿度调节旋扭按下，再将湿度调节旋扭转动至所需培养湿度，此后由湿度调节器自动调整湿度。