（一）试药准备

1. CSB缓和冲突液：42mM宁檬酸钠；0.83百分之百 N-lauryl sarcosine（十二烷基，N甲基甘氨酸钠）；0.2 mM β-巯基酒精。

2. 改变性别液：异硫氰酸胍（终液体浓度 4 M）25g、CSB缓和冲突液 33ml,混合直到绝对溶解，可在65℃助溶。4℃保留备用。

3. 2 M乙酸钠：pH 4.0。

4. 异丙醇

5. 无薄酒精、70百分之百酒精

6. 酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）

7. DEPC H2O:100ml ddH2O中，参加DEPC 0.1ml,弃分振动，37℃孵化过夜。15磅高压灭茵，4℃保留备用。

（二）操作步骤

1. 样品处置：

（1）培育细胞：使聚在一起细胞1-2×107，离心，500g×5min。对于贴壁培育细胞，用0.25百分之百胰蛋白酶-EDTA克化后，PBS重悬细胞并转移至10ml离心管中；悬浮培育细胞可直接转移离心管；离心：500g×5min；PBS荡涤2次。弃上清，置冰浴。加预冷改变性别液2 ml，充分摇摆，使细胞裂解绝对。以收操作均在冰浴中施行。

（2）团体：取1-2g团体（新奇或-70℃及液氮中保留的团体均可）置团体匀浆器中，参加预冷的改变性别液12ml，在冰浴中充分匀浆。

2. 加2 M乙酸钠（pH 4.0）0.2ml，混合后将溶液转移至5ml离心管中。

3. 加酚：氯仿：异戊醇2.2ml，颠倒混合用力气振动10s，冰上安放10min。

4. 4℃离心，12000g×20min。

5. 谨慎汲取领导包括RNA的水相，并转移至一新的5ml离心管中。防止汲取两相之间的蛋白事物。

6. 加等大小的异丙醇，置-20℃至少30min，沉淀RNA。

7. 4℃离心，12000g×15min。

8. 弃上清，再加改变性别液2ml重悬RNA沉淀物，振动直到RNA绝对溶解（不可缺少时可65℃水浴促溶）。

9.  参加等大小异丙醇，置-20℃ 30min。

10. 4℃离心，12000g×15min。

11. 弃上清，参加70百分之百酒精4ml荡涤RNA沉淀。4℃离心，8000g×5min。

12. 弃上清，将沉淀晾干。

13. 参加数量适宜DEPC H2O溶液解RNA（65℃促溶10-15min）。

（三）注意事情的项目：

1. 全部实验过程均须防止Rnase的污染。

2. 要防止沉淀绝对干燥，否则RNA难于溶解。