293T（人胚肾细胞） 百欧博伟生物

 

人胚肾细胞；293，上皮状，早期报道中指出该细胞基因组中含有腺病毒5（Ad5）基因组的左侧端和右侧端的DNA，但是明确了只存在其左侧端的DNA。经过对Ad5的插入点的克隆测序发现，Ad5的1～4344位线性核苷酸整合入细胞染色体19q13.2。该细胞为人类腺病毒载体扩增的宿主。可表达异常的玻连蛋白的细胞表面受体，由整合素β1亚单位和玻连蛋白受体α-v亚单位组成。生物安全级别为2级。

 

一、细胞简介

平台编号：bio-72947

规格：1×10?cells/T25培养瓶

拉丁属名：293T[HEK-293T]

细胞名称：293T（人胚肾细胞）

种属：人

年龄（性别）：胎儿

组织来源：肾

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

背景描述：293T细胞是293 [HEK-293]细胞株插入了SV40 T-antigen的温度敏感基因形成的高转衍生株。

生长培养基：DMEM高糖(货号:PM150210)＋10% FBS(货号:164210-500)＋1% P/S(货号:PB180120)

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃

传代方法：1:10~1:20传代，每2~3天换液1次。

传代情况：P20

应用领域：表达SV40大T抗原，可用于转染和作为包装细胞；用于瞬时转染时可高表达AP融合蛋白。293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。@2017

说明书下载：293T.pdf

 

二、细胞培养方法

1、复苏细胞

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2、传代方法

将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；

3、生长条件

37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。

4、生长特性

细胞贴壁不牢，加胰酶消化时，细胞会成块脱落，几秒就要把多余的胰酶吸走，余0.5ml多消化一会。培养过程中增殖缓慢，细胞密度大概在70%左右。

5、存储条件

冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

6、细胞冻存

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

 

三、运输和保存

使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T75培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

 

四、细胞用途：仅供科研使用。

                       

五、注意事项

1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 

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