人卵巢癌细胞传代方法及保存方式！

 

一、细胞简介

平台编号：bio-73156

拉丁属名：SK-OV-3

细胞名称：SK-OV-3（人卵巢癌细胞）

种属：人

年龄：（性别） 女；64岁

组织来源：卵巢腺癌，腹水转移

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

细胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

传代方法：首次建议1:2-1:3 两天换液一次

冻存条件：90%FBS+10%DMSO

背景描述：SK-OV-3细胞是由G·Trempe和L·J·Old于1973年从卵巢肿瘤病人的腹水分离得到。SK-OV-3细胞对肿瘤坏死因子和几种细胞毒性药物包括白喉毒素、顺铂和阿霉素均耐受。SK-OV-3细胞在裸鼠中致瘤，且形成与卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。

生长培养基：McCoy＇s 5A(货号:PM150710)＋10% FBS(货号:164210-500)＋1% P/S(货号:PB180120)

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃  

供应限制：仅供研究之用

 

二、人卵巢癌细胞传代方法

1、用 75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行 1-3 小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入 5-6mL 新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代；

2、待细胞长满瓶底面积 80%-90%，需要对其进行传代，次传代比例为 1:2；

3、传代步骤：将 0.25%含 EDTA 胰酶置于 37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入 3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加 1-2 ml 预热好的胰酶，置于 37°孵育消化（次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为*佳消化时间，记录*佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入 1ml 完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm 离心 3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。

 

三、人卵巢癌细胞保存方式

冻存条件：90%完全培养基+10%DMSO

(备注：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用 4 度保存的冷冻液直接重悬细胞，不能预热后使用。)

保存条件：液氮存储

 

四、人卵巢癌细胞常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间*长不宜超过 72 小时）。

3、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2 小时后观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

 

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