AGS人胃腺癌细胞培养步骤及传代方法！

 

一、细胞简介

平台编号：bio-72964

规格：5×10?cells/T25培养瓶

拉丁属名：AGS

细胞名称： AGS（人胃腺癌细胞） 

种属：人

年龄（性别）：女；54岁

组织来源：胃；胃癌

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

背景描述：AGS细胞源自一个未经治疗的切除肿瘤碎块；据报道，AGS细胞的植板率为34%。

生长培养基：Ham＇s F-12(货号:PM150810)＋10% FBS(货号:164210-500)＋1% P/S(货号:PB180120)

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃

细胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

培养条件：RPMI-1640 +10% FBS；37℃，5% CO2

传代方法：首次建议1:2-1:3 两天换液一次

冻存条件：90%FBS+10%DMSO

细胞用途：仅供科研使用。

说明书下载：AGS.pdf

 

二、细胞运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：

（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；

（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

               

三、细胞接受后的处理

1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3）弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的完全培养基。

4）如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。

5）接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

 

四、细胞培养步骤

1、培养基及培养冻存条件准备：

1）准备F12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

2、细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

 

五、细胞传代方法

1、用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；

2、待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，传代比例为1:3到1:6；

3、传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为*佳消化时间，记录*佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。

 

六、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间*长不宜超过 72 小时）

3、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

 

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