K-562人慢性髓原白血病细胞复苏操作说明！

 

细胞简介

平台编号：bio-73071

规格：1×10?cells/T25培养瓶

拉丁属名：K-562

细胞名称：K-562（人慢性髓原白血病细胞）

种属：人

年龄（性别）：女；53岁

组织来源：骨髓；慢性骨髓性白血病(CML)

生长特性：悬浮

细胞形态：淋巴细胞样

背景描述：连续细胞株K-562是由Lozzio从一位临终的53岁女性慢性骨髓性白血病患者的胸水中建立。K-562细胞被归入高度未分化的粒性白细胞类，Erson等对其表面膜性质的研究表明，K-562细胞是一株人类红白血病细胞。K-562细胞在自然杀伤分析中广泛作为高敏感的体外受体，See Pross等将K-562细胞用于NK细胞的体外详细检测，包括NK细胞活性的数学量化。K-562母细胞是多能性造血恶性细胞，它能自发分化成可识别的红血球祖细胞、粒性白细胞、单核细胞等。K-562细胞是EBNA阴性的。

生长培养基：IMDM(货号:PM150510)＋10% FBS(货号:164210-500)＋1% P/S(货号:PB180120)

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃

说明书下载：K-562 [K562].pdf

 

K-562（人慢性髓原白血病细胞）细胞常规说明：

冻存液成分：10%DMSO+40%FBS+50%基础培养液

细胞质检情况：不含细菌、真菌、支原体等微生物污染

传代建议：1:2~1:3传代，2~3天换液1次

特别提醒：签收细胞后，如细胞状态不佳，或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系，以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据，请务必重视。

 

K-562（人慢性髓原白血病细胞）细胞复苏

1、把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

2、把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。

3、把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。

4、标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

5、3天换一次培养基。

 

培养基： D-MEM/F-12培养基(GIBCO,货号12400024，添加L-glutamine 150mg/L, NaHCO3 1.5g/L)，90%；0.3mg/ml G418；优质胎牛血清，10%。 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：33.5摄氏度。

生长特性： 贴壁生长

 

K-562（人慢性髓原白血病细胞）在进行细胞传代培养的时候，胰蛋白酶作用的时间是在1～3分钟，由于我有好几个培养瓶（4个以上）的细胞都需要进行传代操作，那么就胰酶消化这一步而言，我是该一个培养瓶一个培养瓶这么分开做，还是可以几个同时做呢？同时做我怕后来操作的培养瓶中的细胞消化过度啊！一个一个的做会不会又太费时呢？

1、一个一个做！防止污染，和消化细胞时间的不均匀。

2、原则上，为了避免细胞系之间的污染，应该一个一个的做。但是如果你能保证无菌操作的原则，K-562（人慢性髓原白血病细胞）也能把握好各种贴壁细胞系消化的时间，是可以同时做，这样效率高。建议你刚开始一个一个的做，熟练以后根据具体情况决定如何做。

3、4个可以同时做，时间到了用移液枪给4个瓶加含血清的培养基终止就行。

4、新手的话强烈建议一个一个处理细胞，特别是消化，除非你养的细胞对消化都不敏感，不然很容易消化过度或者不到位。另外同时处理多个细胞容易出现细胞间交叉污染，一旦污染基本没救，比细菌污染还要麻烦。

5、刚开始还是一个一个来，K-562（人慢性髓原白血病细胞）消化的时间与细胞的来源有很大关系，贴壁性强的细胞，需要消化的时间较长。一般除了贴壁性强的癌细胞外，细胞消化时间1-3min，还有胰蛋白酶的浓度有关系，浓度高的消化时间要短一些，不然会消化过了，对于细胞的生长不好。你可以在分散打入胰蛋白酶时，轻晃培养瓶，在显微镜下看见细胞开始变亮，皱缩，卷边的时候就加入培养液或者血清终止消化。

 

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