BT-474 BT474（人乳腺导管癌细胞）

         BEL-7402细胞是于1974年从临床肝癌手术标本中建立的；BEL-7402细胞群体倍增时间为20小时，移植到处理过的Wistar大鼠中的能形成肿瘤结节，BEL-7402细胞形态呈上皮样细胞。在电子显微镜下，BEL-7402细胞亦显示上皮细胞所具有的桥粒和张力原纤维，与临床肝癌细胞相似。BEL-7402细胞分瓶培养第四天时，其有丝分裂指数约为7%。BEL-7402细胞的染色体数为不足三倍体，有一个异常的近端着丝点染色体。间接免疫荧光法测BEL-7402细胞内的AFP为阳性反应；LDH同工酶谱显示，BEL-7402细胞与成年人肝细胞不同，而与人胚肝及临床肝癌相近。

细胞名称：BT-474 [BT474]人乳腺导管癌细胞
组织来源：T淋巴细胞；急性淋巴细胞白血病
生长特性：悬浮细胞形态淋巴母细胞样
背景描述：
6T-CEM细胞是一个CCRF-CEM [CCRF CEM]的6-硫鸟嘌呤抗性变种；HPRT、HGPRT缺陷并能分泌高滴度的免疫抑制因子。6T-CEM细胞通常用作T细胞杂交瘤的融合对象。
生长培养基RPMI-1640(货号:PM150110)＋10% FBS(货号:164210-500)＋1% P/S(货号:PB180120)
培养条件气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃

BT-474 [BT474]人乳腺导管癌细胞产品说明

规格：70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶
货期：1-2周
运输方式：快递运输

BT-474人乳腺导管癌细胞

售后：收到细胞后12天，如发现细胞有质量问题（如污染，死亡，快递运输等原因）时，应出具书面质量问题报告并及时传真或致销售人员，我们将尽快为您解决！上海文韧生物与您携手共进！以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考，具体操作还需要根据到货时细胞密度，细胞生长状态等具体情况，酌情处理，如需要更详细技术指导，请及时或邮件。需要特别指出的是：如细胞出现问题，请于48h内及时反馈，本公司将竭诚为您服务！

一．贴壁细胞 客户接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。严格无菌操作，打开细胞培养瓶。将细胞培养瓶内的培养基用吸管吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。 1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2 培养。 Hela人宫颈癌细胞
二．BT-474 BT474（人乳腺导管癌细胞）悬浮细胞
 1. 接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。
2. 肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。
3. 严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管吸出（严禁直接倾倒）。
5. 1000rpm,5min离心，重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃,5%CO2 培养。
三．一毫升小管操作方法 小管内也是此细胞。
 1. 用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）
2. 严格无菌操作，用吸管吸出管中细胞至9ml培养基混匀。
3. 1000rpm,5min离心，重悬细胞。
 4.换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO7 培养。

            细胞的培养直接关系着实验的成败，所以不少科研人员做细胞培养实验时因被污染而感到十分的苦恼，想要防止过程中发生污染情况，首先就要做好预防，只有预防工作做好了才能将发生污染的可能性降到z小程度。那么怎样才能做到预防污染呢？上海文韧生物有妙招，本公司的技术人员在这里为您整理出几个妙招，供您参考。 

 从物品、用品消毒灭菌着手：

      所用物品清洗、消毒要，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。

从操作者做起：

     1. 操作者责任心要强，要细心稳重，操作技术要熟练。进无菌室前要用肥皂洗手或用5%新洁尔灭浸泡5分钟，按规定穿隔离衣。进入后关好门，坐下来尽量少走动。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。事先要严格检查器材、溶液和培养物，不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随便使用，以免造成大批污染。

     2. 操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。

     3. 操作时要常更换吸管，切勿一根吸管做到底。一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕及时收拾，保持实验室清洁整齐，z后用消毒水浸泡的纱布擦台面。

 
防止细胞交叉污染：
    1. 在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，做上标记便于辨别。并按顺序进行操作，避免一起进行时易发生混乱。

    2. 在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。

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