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技术文章
猪5羟色胺(5-HT)酶联免疫分析试剂盒使用
点击次数：12297 发布时间：2020/5/26 19:32:28
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
7pg/ml-300pg/ml
使用目的：
本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中5羟色胺(5-HT)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪 5 羟色胺(5-HT)水平。用纯化的猪 5 羟色胺
(5-HT)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入5羟色胺(5-HT)，再 与HRP标记的5羟色胺(5-HT)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的 5 羟色胺(5-HT)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中猪5羟色胺(5-HT)浓度。
试剂盒组成
| 1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 8 | 标准品（480pg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 |
| 4 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 10 | 说明书 | 1 份 |
| 5 | 显色剂A 液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2 张 |
| 6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1个 |
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
| 240pg/ml | 5号标准品 | 150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液 |
| 120pg/ml | 4号标准品 | 150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液 |
| 60pg/ml | 3号标准品 | 150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液 |
| 30pg/ml | 2号标准品 | 150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液 |
| 15pg/ml | 1号标准品 | 150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液 |
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，
然后再加待测样品10µl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计
算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
原创作者：上海研启生物科技有限公司
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