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非洲猪瘟(ASF)酶联免疫分析试剂盒使用

点击次数: 320发布时间:2011/3/7

  • 上 传 者: 上海研启生物科技有限公司
  • 上传时间: 2020/5/25 20:27:24
  • 文件大小: 52KB
  • 文件类型: jpg
  • 所属分类: 操作维修手册
  • 下载次数: 5次
  • 查看次数: 320

资料简介: 非洲猪瘟(ASF)酶联免疫分析试剂盒使用

本试剂盒仅供研究使用。

96T

使用目的:

本试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中非洲猪瘟(ASF)表达。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中非洲猪瘟(ASF)表达。用纯化的非洲猪瘟(ASF)抗体包被微孔板制成固相抗体可与样品中非洲猪ASF相结合经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的非洲猪瘟(ASF)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色用酶标仪450nm长下测定吸光OD CUTOFF 值相比较,从而判定标本中非洲猪瘟(ASF)的存在与否。

试剂盒组成

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1

7

终止液

6ml×1

2

酶标试剂

6ml×1

8

阳性对照

0.5ml×1

3

酶标包被板

12孔×8

9

阴性对照

0.5ml×1

4

样品稀释液

6ml×1

10

说明书

5

显色A 

6ml×1

11

封板膜

6

显色B

6ml×1/

12

密封袋

1

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测NaN3的样品,NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1. 编号将样品对应微孔按序编号每板应设阴性对2阳性对2空白对1

孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先

加样 40µl再加 10µl将样,尽不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

3. 温育:用封板膜封板后37℃温30分钟。

4. 配液:30倍浓缩洗涤液用蒸馏30倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试50µl,空白孔除外。

7. 温育:操作3


8. 洗涤:操作5

9. 显色:每孔先加入显色A50µl,再加入显色B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15分钟.

10. 终止:每孔加终止50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色

11. 测定调零450nm波长依OD  加终止液15分钟以内进行。

操作程序总结:计算和结果判定:

试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定:样OD < 临界值(CUT OFF)者为非洲猪瘟(ASF)阴性

阳性判定:样OD 临界值(CUT OFF)者为非洲猪瘟(ASF)阳性

注意事项

1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。


2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

4封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物请避光保存。

6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长630nm

7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸,使用时必须

注意安全。

保存条件及有效期

1.试剂盒保存2-8℃。

2.有效期:6个月

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