（1） 固相载体的挑选：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在运用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一试验条件下进行反响，调查其显色反响是否均一性，据此判明其吸附功能是否良好。

（2） 包被抗体（或抗原）的挑选：将抗体（或抗原）吸附在固相载体外表时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时刻及其蛋白量也有必定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，调查阳性标本的OD值。挑选OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于大都蛋白质来说一般为1～10μg/ml。

（3） 酶符号抗体作业浓度的挑选：首先用直接ELISA试剂盒法进行初步效价的滴定（见酶符号抗体部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参阅品及酶符号抗体分别为不同的稀释度）在正式试验系统里准确地滴定其作业浓度。

（4） 酶的底物及供氢体的挑选：对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反响，而自身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌效果，应留意防护。有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是现在较为满意的供氢体。底物效果一段时刻后，应加入强酸或强碱以停止反响。一般底物效果时刻，以10-30分钟为宜。底物运用液有必要新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。