服务简介

一个完整的表达系统通常包括配套的表达载体和表达菌株，将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌(Escherichia coli)用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。近年来，大肠杆菌表达系统得到了完善与发展。

大肠杆菌表达系统是基因表达技术中的经典表达系统。利用该系统表达重组蛋白具有许多优越性，但其表达效率受诸多因素的影响。综述了国内外利用大肠杆菌表达系统高效表达外源蛋白的策略，主要包括选择合适的启动子、改变信号肽结构、提高 mRNA稳定性、提高翻译效率、表达稀有密码子、降低包涵体形成及蛋白降解，利用融合蛋白与分子伴侣、调控发酵条件实现高密度培养等。

大肠杆菌蛋白表达系统主要有以下特点：遗传背景清楚；易于培养和控制；转化操作简单；表达水平高；成本低；周期短。百欧泰不断综合完善突破难题并实际结合客户实验需求，提供满意的服务。

 服务步骤

1 基因合成及密码子优化（可选）

基因序列通过密码子优化后，蛋白表达量可提高几倍至数十倍

2 载体构建

载体标签的选择

根据客户具体实验要求，选择GST，Trx，SUMO，BMP，His，HA，Flag，myc等适合标签

克隆至表达载体

3 表达菌株筛选

将表达质粒转化到高效的E. coli表达菌株中

SDS-PAGE电泳检测

挑选多个合适的单克隆单菌落用于目标蛋白的表达鉴定

提供客户含重组质粒的表达菌株

可提供表达菌株：DH5α, Top10, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, Golden, Rosetta(DE3), RosettaBlue(DE3),Rosetta gami B (DE3), C41等宿主

4 蛋白表达及纯化

诱导表达目标蛋白

通过IPTG,阿拉伯糖，热休克，冷休克方式诱导目标蛋白在菌株中的表达

纯化目的蛋白

通过亲和层析，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化目的蛋白

可根据需求切除标签，再纯化获得目标蛋白。提供客户纯化后的目标蛋白，可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的终蛋白，纯度根据客户要求可达95%以上甚至更高。

5 包涵体复性

蛋白诱导表达与包涵体纯化

数百种缓冲条件快速筛选佳复性缓冲，采用稀释复性，透析复性，柱层析复性等多种技术获得纯度大于90%的包涵体

6 蛋白大规模制备

高密度发酵培养

如果想要纯化获得克蛋白，需要使用发酵罐发酵获得上百克到公斤的菌体，百欧泰生物提供成熟的发酵罐发酵平台进行大肠杆菌或者酵母菌的高密度发酵

7 交付结果（可商榷）

测序报告

表达菌株

纯化蛋白

SDS-PAGE/WB报告

COA