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储液器中的流动相被高压泵打入检测系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样本浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式输出检测结果。
色谱特点高效液相色谱仪操作步骤如下：
1)． 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜.
2)． 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)． 打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)． 进入hplc控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5)． 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
6)． 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
7)． 设计走样方法。
8)． 进样和进样后操作。
9)． 关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10)． 填写登记本，由负责人签字。
11)． 流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。
12)． 柱子是非常脆弱的，次做的方法，先不要让液体过柱子。
13)． 所有过柱子的液体均需严格的过滤。
14)． 压力不能太大，不要超过2000 psi。
高压——压力可达150～300 kg/cm2。色谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。
高速——流速为0.1～10.0 mL/min。
高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。
HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：
速度快——通常分析一个样品在15～30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。
分辨率高——可选择固定相和流动相以达到*佳分离效果。
灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。
色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。
样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。
国家标准：《高效液相色谱仪》（GB/T 26792-2011）
