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RTS BL21(DE3) Chaprone助溶表达感受态细胞
点击次数：52 发布时间：2022/7/13 14:34:46
BL21(DE3)Chaprone感受态细胞中含有分子伴侣蛋白质粒，其表达产物可协助重组蛋白正确折叠形成可溶活性蛋白。分子伴侣蛋白质粒为氯霉素抗性（chloramphenicol，Cmr）的表达受控于四环素（tetR）操纵子，因此该感受态不适用于氯霉素抗性表达质粒的转化。
本BL21(DE3)Chaprone感受态细胞使用独有的化学感受态利技术制备，其室温可保存3天、-20°C可保存2年（推荐保存温度）、-80°C可保存性能无下降。运输过程中无需干冰，可室温运输、可常规冰袋运输（推荐运输温度）。该感受态细胞为热激感受态细胞，转用于蛋白表达（不可用于克隆和载体构建），经42°C热激1min可获得105～106cfu/μg效价，可满足质粒转化要求。该制品使用简单、运输、储存方便。
储存
RTS系列感受态为干粉形式，均可室温保存3天，保存-20°C（2年）。经Nano E.coli Transfection Reagent溶解后的感受态必须分装后，并于-60°C以下保存。溶解后的感受态细胞避免反复冻融，在-60°C以下可保存6个月。
使用方法
1. 从-20°C冰箱中取出Nano E.coli Transfection Reagent融化，放置于冰上。取300 μl Nano E.coli Transfection Reagent加入到一支冻干感受态细胞中，并分装到10支1.5 ml EP管中（每支30 μl），于-60°C以下保存（或立即使用）。
2. 将10～100 ng质粒DNA（不可使用连接产物、不可使用氯霉素筛选标记质粒）加入到分装的感受态细胞中，轻弹EP管（或枪头轻轻吹打），置于冰上15min。
3. 置于42°C热激1 min后，迅速置于冰上急冷2 min。
4. 热激完毕后，向上述感受态细胞中加入450 μL不含抗生素的SOC（或LB）培养基，37°C振荡（225 rpm）培养60 min。使质粒上抗性标记基因表达，菌体复苏。
5. 取200 μl复苏菌液涂布到含相应抗生素的LB琼脂平板表面。（含相应质粒抗生素和20 μg/ml氯霉素）
6. 将平板置于37 °C培养，12~18小时后可出现菌落。
7. 挑选生长良好的菌落，接入LB培养基（含相应质粒抗生素，20 μg/ml氯霉素），37℃剧烈振荡培养过夜。
8. 1/50比例接入新的LB培养基（含相应质粒抗生素，20 μg/ml氯霉素，0.5 mg/ml L-阿拉伯糖）37 ℃剧烈振荡培养至菌体密度OD600约0.3（约2h）。
9. 加入终浓度2 ng/ml四环素（诱导chaprone伴侣蛋白表达），37℃剧烈振荡培养至OD600约0.5（约2~4h）。
10. 加入适量IPTG(0.1-1 mM), 15℃振荡培养24h（培养摇床无法制冷条件下，室温诱导8～12h）。
11. 4,000 rpm室温离心15 min，收集细胞，进行蛋白表达和可溶性表达分析。
原创作者：上海圻明生物科技有限公司
