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T4 RNA 连接酶2（K227Q）
点击次数：41 发布时间：2022/7/13 14:49:05
截短型T4 RNA连接酶2为T4 RNA连接酶2的突变体，能特异性将5’末端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA的3’ OH末端。与野生型与T4 RNA连接酶2相比，截短型T4 RNA连接酶2催化的的连接反应无需ATP，但需预腺苷化接头，这样连接反应的背景程度的降低，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性。该酶可用于二代测序small RNA 的文库构建，优化了接头的连接过程。
应用
将预腺苷化的DNA或RNA序列连接到任何RNA的3’末端
将单链腺苷化引物连接至小RNA上，用于cDNA文库构建
将单链腺苷化引物连接至RNA上，用于链特异性cDNA文库构建
活性定义
200单位指在标准反应体系，25℃反应条件下，1h能将80%的31-merRNA连接到预腺苷化的17-merDNA末端所需的酶量。
储存
-20℃可保存3年。
使用注意事项
1. 1× T4 RNA Ligase Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，10mM MgCl2，1mM DTT。该酶反应时不需要ATP。
2. 反应温度37℃，65℃ 10min可使该酶失活。
3. 该酶的连接接头需要5’-预腺苷化，不能连接磷酸化底物。
4. 该酶不能连接双链DNA或RNA。
5. 加入终浓度5~10% PEG 8000可提高连接效率。
原创作者：上海圻明生物科技有限公司
