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单宁酶（Tannase，TAN）试剂盒2022资料已更新
单宁酶（Tannase，TAN）试剂盒
http://www.app17.com/c156980/products/d11282793.html
单宁酶（Tannase，TAN）试剂盒说明书
分光光度法50管/24样
注 意：正式测定务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
单宁酶全称是单宁酯酰水解酶(Tannase，EC 3.1.1.20)，它可以水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚羧键，生成没食子酸和葡萄糖。
测定原理：
使用抗氧化剂没食子酸丙酯（PG）作为单宁酶酶促反应的底物，在270nn下测定底物PG反应后的光密度变化,计算单宁酶酶活力。
需自备的的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰、蒸馏水
试剂的组成和配制：
试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1支，4℃保存；临用每支加入3mL试剂一，充分溶解后备用；用不完的试剂4℃保存；
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长到270 nm，蒸馏水调零。
2、加样表
试剂名称（μL） | 对照管 | 测定管 |
95℃水浴5min后灭活的粗酶液 | 50 |
|
粗酶液 |
| 50 |
试剂二 | 50 | 50 |
混匀，40℃准确保温10 min后，置95℃水浴中10 min（盖紧，防止水分散失），冷却
试剂一 | 900 | 900 |
混匀，270nm处读取各管吸光值。计算ΔA=A对照-A测定。每个测定管需设个一个对照管。
注意：
可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行5min 95℃沸水浴处理。
TAN活力单位的计算：
标准条件下测定回归方程为y = 0.0058x + 0.0044，R2 = 0.9994；x为PG含量（µmol/L），y为吸光值。
单位的定义：40℃下每毫升粗酶液每分钟水解减少0.01µmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位。
TAN活性(µmol/min/mL)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷V样÷T
=34.48×( ΔA-0.0044）
2、按照蛋白浓度计算
单位的定义：40℃下每毫克蛋白每分钟水解减少0.01µmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。
TAN活性((µmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷(V样×Cpr)÷T
=34.48×(ΔA-0.0044）÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位的定义：40℃下每克样品每分钟水解减少0.01µmol底物PG所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。
TAN活性(µmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V反总÷0.01÷(V样÷V样总×W)÷T
=34.48×(ΔA-0.0044）÷W
V反总：反应体系总体积，1mL； V样：加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
原创作者：上海圻明生物科技有限公司
