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天冬酰胺合成酶(asparagine synthetase，AS)活性测定试剂盒#2022价格已更新
天冬酰胺合成酶(asparagine synthetase，AS)活性测定试剂盒
http://www.app17.com/c156980/products/d11266113.html
天冬酰胺合成酶(asparagine synthetase，AS)活性测定试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
注 意：正式测定务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
天冬酰胺合成酶是广泛存在于生物体内的一类氨基转移酶，催化谷氨酞胺的氨基向天冬氨酸转移。当植物处于氨毒时天冬酞胺的形成是一种解毒反应。
测定原理：
AS催化L-天冬酰胺水解成L-天冬氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。
需自备仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一×1瓶，60 mL，4 ℃保存；
试剂二×1瓶，20 mL，4 ℃保存；
试剂三×1瓶，30 mL，常温保存；
试剂四×1瓶，10 mL，常温保存；
试剂五×1瓶，6 mL，常温保存；
试剂六×1瓶，6 mL，常温避光保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零。
2、样品测定（在EP中加入下列试剂）：
试剂名称（uL） | 测定管 | 对照管 |
样本 | 25 |
|
蒸馏水 |
| 25 |
试剂一 | 100 | 100 |
试剂二 | 400 | 400 |
混匀，37℃水浴1 小时
试剂三 | 525 | 525 |
混匀，8000 g，25℃离心10 min；取上清液，在EP管中加入下列试剂
上清液 | 650 | 650 |
试剂四 | 150 | 150 |
试剂五 | 100 | 100 |
试剂六 | 100 | 100 |
混匀，室温静置15min，420nm处读取吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。对照管只要做一管
注意：试剂六如出现沉淀，静置后取上清使用。
计算：
标准条件下测定的回归方程为y = 0.662x -0.0434；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值A。。
1、血清（浆）AS活性
单位定义：每mL血清（浆）每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS（μg/h/mL）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷V样÷T=31.722×(ΔA+0.0434)
2、组织、细菌或细胞中AS活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS活力（μg/h/mg prot）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷(V样×Cpr)÷T =31.722×(ΔA+0.0434) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每小时产生1μg氨定义为一个酶活力单位。
AS活力（μg/h/g 鲜重）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T =31.722×(ΔA +0.0434) ÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。
AS活力（μg/h/104 cell）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.0634×(ΔA+0.0434)
T：反应时间，1h； V反总：反应体系总体积：0.525mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.025mL；V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500万
原创作者：上海圻明生物科技有限公司
