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pECMV-Ntrk1-m-FLAG
点击次数：243发布时间：2020/11/17 12:56:51
更新日期：2024/12/3 11:29:54
所 在 地：中国大陆
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详细内容
使用方法
pECMV-Ntrk1-m-FLAG收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（请务必转化挑单克隆重提后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl 无菌水溶解质粒；
②取2μl质粒加至100μl 感受态中，冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入500μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
④取10μl、100μl复苏液，并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上；
⑤将平板正向培养1h，再倒置37度培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（如果菌落过多，请将质粒稀释后再转化。如果无菌落，请加入10μl质粒离心全涂转化）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌：四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌：穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、平板：直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒：单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
pECMV-Ntrk1-m-FLAG是一个大肠杆菌表达载体，Tac强启动子可以驱动GST促溶标签和目的基因融合表达，LacI阻碍蛋白和Laco操作子使本质粒在没有加入IPTG之前禁止表达，防止其影响细菌生长。表达后的融合蛋白可用凝血酶蛋白酶切割，再过一次GST柱子即可清除掉GST标签。
产品相册
pECMV-Ntrk1-m-FLAGAddgene NGS results
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TAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAA……欢迎免费索取更多详细完整图谱资料。
操作流程
pECMV-Ntrk1-m-FLAG到货后请根据标签上文字判断产品属性（质粒/甘油菌）
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pECMV-Ntrk1-m-FLAG转化前请准确查找该质粒相应的抗生素名称、抗生素使用浓度、感受态名称和培养温度。
pECMV-Ntrk1-m-FLAG转化前请准确查找该质粒相应的抗生素名称、抗生素使用浓度、感受态名称和培养温度。
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mEA-H12663人皮质类固醇11β脱氢同工酶2(HSD11B2)elisa试剂盒
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mEA-H12665人皮质醇结合球蛋白(CBC，CBG)elisa试剂盒
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mEA-H12714人磷脂酰肌醇1磷酸(PIP1)ELISA试剂盒
mEA-H12715人磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2)ELISA试剂盒
mEA-H12716人磷脂酰肌醇抗体(PI-Ab)ELISA试剂盒
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mEA-H12718人磷脂酰肌醇激酶-3催化亚基α基因(PIK3CA)ELISA试剂盒
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mEA-H12756人磷酸化核转录因子p65(p p65)ELISA试剂盒
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mEA-H12758人磷酸化磷酸肌醇3激酶(P-PI3K)ELISA试剂盒
mEA-H12759人磷酸化神经丝H(pNF-H)ELISA试剂盒
mEA-H12760人磷酸化糖原合成酶激酶3α(PGSK3α)ELISA试剂盒
公司介绍
Shanghai Qi Ming Biotechnology Co., Ltd
Shanghai Qi Ming Biotechnology Co., Ltd
B-5-3-2118,Guanghua Road, Minhang District, Shanghai
Tian Lin Branch of Shanghai Rural Commercial Bank
Tianlin Road No. 588, Xuhui District, Shanghai
