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pCMV-SPORT6-NDUFB6
点击次数:202发布时间:2020/11/20 11:21:52
更新日期:2024/12/3 11:30:06
所 在 地:中国大陆
产品型号:
优质供应
详细内容
使用方法
pCMV-SPORT6-NDUFB6收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(请务必转化挑单克隆重提后使用)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl 无菌水溶解质粒;
②取2μl质粒加至100μl 感受态中,冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入500μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
④取10μl、100μl复苏液,并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
⑤将平板正向培养1h,再倒置37度培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(如果菌落过多,请将质粒稀释后再转化。如果无菌落,请加入10μl质粒离心全涂转化)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌:四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌:穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、平板:直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒:单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
pCMV-SPORT6-NDUFB6是一个大肠杆菌表达载体,Tac强启动子可以驱动GST促溶标签和目的基因融合表达,LacI阻碍蛋白和Laco操作子使本质粒在没有加入IPTG之前禁止表达,防止其影响细菌生长。表达后的融合蛋白可用凝血酶蛋白酶切割,再过一次GST柱子即可清除掉GST标签。
产品相册
pCMV-SPORT6-NDUFB6Addgene NGS results
GTTTCGGTGATGACGGTGAAAACCTCTGACACATGCAGCTCCCGGAGACGGTCACAGCTTGTCTGTAAGC
GGATGCCGGGAGCAGACAAGCCCGTCAGGGCGCGTCAGCGGGTGTTGGCGGGTGTCGGGGCTGGCTTAAC
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GCAGTTGCATCCGACTTGTGGTCTCGCTGTTCCTTGGGAGGGTCTCCTCTGAGTGATTGACTACCCGTCA
GCGGGGGTCTTTCATGGGTAACAGTTTCTTGAAGTTGGAGAACAACATTCTGAGGGTAGGAGTCGAATAT
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CAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGC
GCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCA
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GGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTA
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TCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAA
TAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAA……欢迎免费索取更多详细完整图谱资料。操作流程
pCMV-SPORT6-NDUFB6货后请根据标签上文字判断产品属性(质粒/甘油菌)
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pCMV-SPORT6-NDUFB6转化前请准确查找该质粒相应的抗生素名称、抗生素使用浓度、感受态名称和培养温度。
pCMV-SPORT6-NDUFB6转化前请准确查找该质粒相应的抗生素名称、抗生素使用浓度、感受态名称和培养温度。
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BF2340pSUPER.retro.neo"质粒(空载体)/质粒(载体)"
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BF2346pLVX-AmCyan1-N1"质粒(空载体)/质粒(载体)"
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BF2420pCold TF"质粒(空载体)/质粒(载体)"
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公司介绍
Shanghai Qi Ming Biotechnology Co., Ltd
Shanghai Qi Ming Biotechnology Co., Ltd
B-5-3-2118,Guanghua Road, Minhang District, Shanghai
Tian Lin Branch of Shanghai Rural Commercial Bank
Tianlin Road No. 588, Xuhui District, Shanghai