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hela/gfp细胞上皮样贴壁生长
点击次数：259发布时间：2020/12/23 9:23:43
更新日期：2024/10/16 15:41:44
所 在 地：中国大陆
产品型号：
相关标签：hela/gfp细胞上皮样贴壁生长
优质供应
详细内容
规格：T25培养瓶
传代比例: 不同细胞生长速度不，具体传代比例视细胞生长速度而定，大部分细胞适用1:3-1:4传代，生长较慢的细胞可以1:2传代。
产特点人源细胞系提供STR鉴定。鼠源细胞系提供种属鉴定。hela/gfp细胞上皮样贴壁生长传代次数低，状态好，活性高。气相液氮罐保藏，杜绝交叉污染，确保细胞复苏存活率。
使用方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的好办法。客户收到hela/gfp细胞上皮样贴壁生长回实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液移入废液缸中，加入6ml新鲜完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）
储存方式无血清冻存液
使用方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的好办法。客户收到hela/gfp细胞上皮样贴壁生长回实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液移入废液缸中，加入6ml新鲜完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）
储存方式无血清冻存液
生物安全等 2
推荐换液频率 2~3次/
倍增时间 ~24-30 hours
冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
致瘤性 Yes, forms tumors in nude mice.
受体表达情况 vitronectin
保藏机构 ATCC; CRL-1573 ATCC： PTA-4488 DSMZ： ACC-305 ECACC： 85120602
Subculturing
Volumes used in this protocol are for 75 cm 2 flasks; proportionally reduceor increase amount of
dissociation medium for culture vessels of other sizes. Flasks do not become 100% confluent. Cells are rounded ａnd have a tendency to float in the medium.
1. Remove ａnd discard culture medium.
2. Briefly rinse the cell layer with 0.25% (w/v) Trypsin-0.53 mM EDTA solution to remove all traces of serum that contains trypsin inhibitor.
3. Add 2.0 to 3.0 mL of Trypsin-EDTA solution to flask ａnd observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed (usually within 5 to 15 minutes).
Note:To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or Shaking the flask while waiting for the cells to detach.Cells that are difficult to detach may be placed at 37℃ to facilitate dispersal.
4. Add 6.0 to 8.0 mL of complete growth medium ａnd aspirate cells by gently pipetting.
5. Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture vessels.
6. lncubate cultures at 37℃.
操作流程
1.吸走多余培养基，加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞；
操作流程
1.吸走多余培养基，加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞；
2.吸干净PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，轻轻摇晃培养皿使胰酶浸没细胞表面，培养瓶放37度培养箱消化；
（细胞对于消化比较敏感，消化过度会严重影响细胞状态，导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落，可以轻轻吹下时即可终止，禁止消化到细胞完全漂浮。混匀细胞时尽量轻柔，不要吹出大量气泡。）
3.加入6-8ml完全培养基终止消化，轻轻吹下细胞混匀；
4.将混匀的细胞1000rpm（约150g）离心3min，弃上清，再用新鲜培养基重悬37度培养箱继续培养；.
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2. 细胞处理
1) 收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中，用PBS清洗细胞培养瓶1-2次，收集清洗液；
2) 1200-1500rpm离心3min，弃上清，收集细胞沉淀；
3) 加入5ml新鲜完全培养基，用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞；将分散好的细胞接种至培养器皿中，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4) 待细胞状态稳定后，培养观察；之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。
注意事项
注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3. 建议客户收到细胞后3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
hela/gfp细胞上皮样贴壁生长只可用于科研。
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