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木质素过氧化物酶（Lignin peroxidase，Lip）试剂盒
点击次数：189发布时间：2022/3/2 14:26:40
更新日期：2024/10/16 15:41:56
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
木质素过氧化物酶（Lignin peroxidase，Lip）试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意 ：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，属于木质素降解酶系，在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。
测定原理：
木质素过氧化物酶催化天青脱甲基，在651nm处测定吸光值减少。
自备实验用品及仪器：
天平、研钵、低温离心机、分光光度计、1 mL玻璃比色皿、可调式移液器、冰。
试剂组成和配制：
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用加入80mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存1个月。
试剂二：液体12mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体12mL×1瓶，4℃保存。
酶液提取：
1. 组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔7，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体：直接检测。
测定操作：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至651nm，蒸馏水调零。
2、临用按每个样本试剂一：试剂二：试剂三= 400:200:200（μL）的比例配制工作液，现配现用。
3、在1mL玻璃比色皿中依次加入如下试剂
|
| 测定管 |
| 样品（μL） | 200 |
| 工作液（μL） | 800 |
| 充分混匀，立即测定651nm处10s和130s吸光值，记为A1和A2，△A=A1- A2 | |
酶活计算公式：
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A651变化0.02为一个酶活力单位。
LiP活性（U/mg prot）= ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.02÷T =125×ΔA÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A651变化0.02为一个酶活力单位。
LiP活性（U/g 鲜重）＝ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.02÷T =125×ΔA÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A651变化0.02为一个酶活力单位。
LiP活性（U/104 cell）＝ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.02÷T =0.25×ΔA
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每mL血清（浆）在每mL反应体系中每分钟A651变化0.02为一个酶活力单位。
LiP活性（U/mL）=ΔA×V反总÷V样÷0.02÷T =125×ΔA
V反总：反应总体积，1mL；V样：反应中样本体积，0.2mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，2min
