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土壤谷氨酰胺酶(solid-glutaminase, S- GLS) 活性测定试剂盒
点击次数：209发布时间：2022/3/3 15:15:56
更新日期：2024/12/3 11:30:42
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
土壤谷氨酰胺酶(solid-glutaminase, S- GLS) 活性测定试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意：正式测定务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
测定原理：
S-GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。
需自备仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、甲苯、冰和双蒸水。
试剂组成和配制：
试剂一×1瓶，8 mL，4 ℃保存；
试剂二×1瓶，20 mL，4 ℃保存；
试剂三×1瓶，30 mL，常温保存；
试剂四×1瓶，10 mL，常温保存；
试剂五×1瓶，6 mL，常温保存；
试剂六×1瓶，6 mL，常温避光保存。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零。
2、样品测定（在EP管中加入下列试剂）：
| 试剂名称（uL） | 测定管 | 对照管 |
| 样本 | 0.1 |
|
| 甲苯 | 25 | 25 |
| 振荡混匀，室温放置15min | ||
| 试剂一 | 100 | 100 |
| 试剂二 | 400 | 400 |
混匀，37℃水浴2 小时
| 试剂三 | 525 | 525 |
混匀，8000 g，25℃离心10 min；取上清液，依次加入下列试剂
| 上清液 | 650 | 650 |
| 试剂四 | 150 | 150 |
| 试剂五 | 100 | 100 |
| 试剂六 | 100 | 100 |
混匀，室温静置15min，420nm处读取测定管和对照管吸光值，
计算ΔA=A测定管-A对照管。对照管只要做一管。
注意：试剂六如出现沉淀，静置后取上清使用。
酶活性计算：
标准条件下测定的回归方程为y = 3.8488x +0.0057；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值A。
单位定义：每g土样每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
S-GLS（nmol/min/g 土样）=(ΔA-0.0057)÷3.8488×V反总÷W÷T×1000
=2.27×(ΔA -0.0057)÷W。
V反总：反应体系总体积：1.05mL；T：反应时间，2h=120min；W：样本质量，g; 1000，μmol到nmol换算系数。
