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土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（Solid-N-acetyl-β-D-glucosidase, S-NAG）试剂盒
点击次数：199发布时间：2022/3/3 15:16:36
更新日期：2024/12/3 11:30:42
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（Solid-N-acetyl-β-D-glucosidase, S-NAG）试剂盒说明书
分光光度法50管/24样
注 意：正式测定务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
S-NAG是溶酶体中的一种酸性水解酶，由土壤微生物分泌。S-NAG活性变化与机体某些病理状态密切相关。
测定原理：
S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算NAG活性。
自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存；（自备）
试剂二：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用每瓶加入6mL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂三：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂四：液体50mL×1瓶，4℃保存；
样品处理：
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
测定步骤：
| 试剂名称 | 测定管 | 对照管 | |||
| 风干土样（g） | 0.05 | 0.05 | |||
| 试剂一（μL） | 25 | 25 | |||
|
| 室温振荡混匀15min | ||||
| 试剂二（μL） | 400 |
| |||
| 蒸馏水（μL） |
| 400 |
| ||
| 试剂三（μL） | 500 | 500 |
| ||
混匀， 37℃振荡反应1h后，立即90℃水浴5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却10000g 25℃离心10min，取上清液
| 上清液（μL） | 500 | 500 |
| 试剂四（μL） | 1000 | 1000 |
充分混匀，室温静置2min后，400nm处蒸馏水调零，测定吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-NAG活力计算：
标准条件下测定的回归方程为y = 0.00645x -0.0054；x为标准品浓度（μmol/L），y为吸光值。
单位的定义：每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-NAG活力（μmol/d/g 土样）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V反总÷W÷T =68.84×(ΔA+0.0054)
T：反应时间，1h=1/24d； V反总：反应体系总体积：9.25×10-4 L；W：样本质量，0.05g。
