产品展示
土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖苷酶(S-C1)活性测定 试剂盒
点击次数:174发布时间:2022/3/3 16:19:59
更新日期:2024/12/3 11:30:42
所 在 地:中国大陆
产品型号:
优质供应
详细内容
土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖苷酶(S-C1)活性测定
试剂盒说明书
分光光度法50管/24样
注 意 :正式测定务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
C1(EC3.2.1.91)存在于细菌、真菌和动物体内,是纤维素酶系的组份,C1催化多聚糖链的末端非还原端释放出纤维二糖和葡萄糖。
测定原理:
采用3,5-二硝基水杨酸法测定C1催化微晶纤维素降解产生的还原糖的含量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体60mL×1瓶,4℃保存;
样品测定的准备:
称取约0.1g新鲜土样或风干土样,加入1mL提取液,进行冰浴匀浆,室温振荡提取30min,然后10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2、加样表(在EP管中依次加入下列试剂):
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
样本 | 50 | 50 |
试剂一 | 500 |
|
蒸馏水 |
| 500 |
混匀,37℃准确水浴2h
试剂二 | 1000 | 1000 |
混匀, 90℃水浴10min(盖紧,防止水分散失),冷却后,测540nm下吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。
S-C1活性计算:
标准条件下测定回归方程为y = 6.4078x - 0.0673;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
单位的定义:每g土样每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
S-C1活力(μg /min /g鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T
=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W
1000:1mg/mL=1000ug/mL;V反总:反应体系总体积,0.55mL; V样:加入样本体积,0.05 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,120 min;W:样本质量,g。