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土壤亚硝酸还原酶（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）试剂盒
点击次数：174发布时间：2022/3/3 16:30:51
更新日期：2024/12/3 11:30:42
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
土壤亚硝酸还原酶（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）试剂盒说明书
分光光度法50管/24样
注 意 ：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶，参与亚硝酸盐至NO的还原反应，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。
测定原理：
亚硝酸还原酶可将NO2—还原为NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2—减少，即540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。
需自备的仪器和用品：
天平、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1mL玻璃比色皿。
试剂的组成和配制：
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用加10mL蒸馏水溶解。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。（如出现沉淀可以70-80℃加热溶解）
试剂四：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。（如出现沉淀可以70-80℃加热溶解）
试剂五：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。
工作液：临用根据用量将试剂四和试剂五以1:1的比例混合。
样品处理：
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
测定操作表：
|
| 空白管 | 对照管 | 测定管 |
| 风干土样（g） |
| 0.1 | 0.1 |
| 蒸馏水（μL） |
| 200 |
|
| 试剂一（μL） | 200 |
| 200 |
| 试剂二（μL） | 200 | 200 | 200 |
| 混匀后，25℃反应1h | |||
| 试剂三（μL） | 200 | 200 | 200 |
| 充分震荡30S，10000rpm，4℃，离心10min | |||
| 上清液（μL） | 500 | 500 | 500 |
| 工作液（μL） | 1000 | 1000 | 1000 |
| 充分混匀，用蒸馏水调零，静置3min后测定540nm处各管吸光值，分别记为A空白管、A对照管、A测定管。 | |||
计算公式：
标准曲线：y = 1.5562x+ 0.0088，R2 = 0.996；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值（A标准管-A空白管）。
酶活单位定义：每g土样每天还原1μmol NO2ˉ 的量为一个酶活力单位。
S-NiR（μmol /d /g土样）=[A空白管-(A测定管-A对照管) -0.0088] ×V标÷1.5562÷W÷T
= 3.084×[A空白管-(A测定管-A对照管) -0.0088]÷W
T：反应时间，1h=1/24d；V标：标准液体积，0.2mL； W：样本质量，g。
注意事项：
1. 配制好的工作液3天内使用完。
2. 若吸光值超过3，将上清液进行适当的稀释后再加入工作液显色，并在计算公式中乘以稀释倍数。
3. 严格控制显色时间，否则会对结果有影响。
4. 标准曲线线性范围为0.03μmol/mL-1.5μmol/mL。
5. A空白管-（A测定管-A对照管）线性范围为0.02-3。
