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土壤几丁质酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）试剂盒说明书
点击次数：185发布时间：2022/3/7 13:01:51
更新日期：2024/12/3 11:30:42
所 在 地：中国大陆
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详细内容
土壤几丁质酶（Soil Chitinase，S-Chitinase）试剂盒说明书
分光光度法50管/24样
注 意 ：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。
测定原理：
几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在585nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器：
天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿，甲苯、蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体4mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体50mL×1瓶，4℃避光保存。
样品处理：
新鲜土样风干，过30-50目筛。
测定操作表：
|
| 对照管 | 测定管 |
| 土样（g） | 0.2 | 0.2 |
| 甲苯（μL） | 30 | 30 |
| 混匀，25℃静置15min | ||
| 蒸馏水（μL） | 200 |
|
| 试剂一（μL） |
| 200 |
| 混匀，37℃培养24h | ||
| 蒸馏水（μL） | 400 | 400 |
| 4000rpm，4℃，离心10min，取上清300μL于新的EP管中 | ||
| 试剂二（μL） | 30 | 30 |
| 混匀，沸水浴5min | ||
| 试剂三（μL） | 900 | 900 |
| 混匀，37℃显色20min，取1mL于1mL玻璃比色皿中，蒸馏水调零，测定585nm处吸光值，记为A对照管和A测定管，ΔA=A测定管-A对照管。 | ||
计算公式：
标准曲线：y=5.2714x-0.0007，R2=0.9989；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值ΔA。
酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
土壤几丁质酶活性（μg/d/g 土样）=（ΔA +0.0007）÷5.2714×V反总÷W÷T×1000
= 598×（ΔA +0.0007）
V反总：反应体系总体积，0.63mL；W：样本质量，0.2g；T：反应时间，1d；1000：1mg/mL=1000μg/mL
注意事项：
1． 试剂一充分混匀后再使用。
