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土壤酸性转化酶（Solid-Acid invertase, S-AI）试剂盒说明书
点击次数：189发布时间：2022/3/7 14:09:37
更新日期：2024/10/16 15:41:56
所 在 地：中国大陆
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详细内容
土壤酸性转化酶（Solid-Acid invertase, S-AI）试剂盒说明书
分光光度法50管/24样
注 意：正式测定务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
S-AI在pH 为4.5~5.0（酸性）条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶。
测定原理：
S-AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范围内510nm光吸收增加速率与AI活性成正比。
自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存;
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用加入25mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存;
试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存；
样品处理：
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
测定步骤和加样表：
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 风干土样（g） | 0.1 | 0.1 |
| 试剂一 |
| 800 |
| 试剂二 | 800 |
|
混匀， 37℃准确水浴30min，95℃水浴10min左右（盖紧，以防水分散失），流水冷却，
充分混匀（以保证浓度不变），10000g 25℃离心10min，取上清液
| 上清液 | 700 | 700 |
| 试剂三 | 350 | 350 |
混匀，95℃水浴10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀， 510nm处，蒸馏水调零，记录各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数)，ΔA=A测定-A对照。
S-AI活性计算：
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值。
单位的定义：每天每g土样中产生1mg还原糖定义为一个S-AI活力单位。
S-AI活力（μg/d /g土样）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V反总÷W÷T ÷1000=240×(ΔA+0.001)
V反总：反应体系总体积：0.8mL；T：反应时间，1/48d； W：样本质量，0.1g；1000：1mg=1000μg。
