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还原型抗坏血酸（ascorbic acid，AsA）含量测定试剂盒
点击次数：211发布时间：2022/3/8 14:26:13
更新日期：2024/10/16 15:41:56
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
还原型抗坏血酸（ascorbic acid，AsA）含量测定试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
AsA又称维生素c。AsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中重要的抗氧化剂，AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标。
测定原理：
在乙酸溶液中，抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼–2–羟基丁酰内酯衍生物，在大吸收波长420处测定吸光度。
自备仪器和用品：
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体4mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×2瓶（棕色），4℃避光保存。临用配制，每瓶加入7 mL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂4℃下可保存3天。
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔7，总时间3min）；8000g，4℃离心20min，取上清液置冰上混匀待测。
3. 血清等液体：直接测定。
AsA测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到420 nm，蒸馏水调零。
2. 在EP管中加入下列试剂
| 试剂名称（µL） | 测定管 | 空白管 |
| 样本 | 200 |
|
| 提取液 |
| 200 |
| 试剂一 | 60 | 60 |
| 试剂二 | 100 | 100 |
| 试剂三 | 240 | 240 |
| 水 | 1400 | 1400 |
混匀，25℃静置20min，吸取1mL加入1mL玻璃比色皿中，420nm下测定各管吸光值。ΔA=A测定-A空
白。
注意：空白管只需测定一次。
AsA含量计算公式:
标准曲线y = 0.0088x - 0.018 ，R2 = 0.9978
(1). 按蛋白浓度计算
AsA (μg/mg prot) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V样÷（Cpr×V样）
=113.63×(ΔA+0.018)÷Cpr
(2). 按样本质量计算
AsA(μg/g 鲜重) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V样÷(W×V样÷V样总)
=113.63×(ΔA+0.018)÷W
(3). 按细胞数量计算
AsA(μg/104 cell) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V样÷(细胞数量×V样÷V样总)
=113.63×(ΔA+0.018)÷细胞数量
（4）按液体体积计算
AsA (μg/mL) =(ΔA+0.018)÷0.0088
=113.63×(ΔA+0.018)
V样：加入样品体积，0.2mL；V样总：加入提取液体积，1.0 mL; Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量（g）。
注意事项：
试剂三现配现用，配制好的4℃保存，3天内使用完。
