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还原型抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)含量测定试剂盒
点击次数:215发布时间:2022/3/8 14:26:13
更新日期:2024/12/3 11:30:42
所 在 地:中国大陆
产品型号:
优质供应
详细内容
还原型抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)含量测定试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意:正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
AsA又称维生素c。AsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中重要的抗氧化剂,AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用,也是衡量农作物产品品质的重要指标。
测定原理:
在乙酸溶液中,抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼–2–羟基丁酰内酯衍生物,在大吸收波长420处测定吸光度。
自备仪器和用品:
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体4mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体6mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×2瓶(棕色),4℃避光保存。临用配制,每瓶加入7 mL蒸馏水充分溶解,用不完的试剂4℃下可保存3天。
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3,间隔7,总时间3min);8000g,4℃离心20min,取上清液置冰上混匀待测。
3. 血清等液体:直接测定。
AsA测定操作:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到420 nm,蒸馏水调零。
2. 在EP管中加入下列试剂
试剂名称(µL) | 测定管 | 空白管 |
样本 | 200 |
|
提取液 |
| 200 |
试剂一 | 60 | 60 |
试剂二 | 100 | 100 |
试剂三 | 240 | 240 |
水 | 1400 | 1400 |
混匀,25℃静置20min,吸取1mL加入1mL玻璃比色皿中,420nm下测定各管吸光值。ΔA=A测定-A空
白。
注意:空白管只需测定一次。
AsA含量计算公式:
标准曲线y = 0.0088x - 0.018 ,R2 = 0.9978
(1). 按蛋白浓度计算
AsA (μg/mg prot) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V样÷(Cpr×V样)
=113.63×(ΔA+0.018)÷Cpr
(2). 按样本质量计算
AsA(μg/g 鲜重) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V样÷(W×V样÷V样总)
=113.63×(ΔA+0.018)÷W
(3). 按细胞数量计算
AsA(μg/104 cell) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V样÷(细胞数量×V样÷V样总)
=113.63×(ΔA+0.018)÷细胞数量
(4)按液体体积计算
AsA (μg/mL) =(ΔA+0.018)÷0.0088
=113.63×(ΔA+0.018)
V样:加入样品体积,0.2mL;V样总:加入提取液体积,1.0 mL; Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量(g)。
注意事项:
试剂三现配现用,配制好的4℃保存,3天内使用完。