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还原型抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)含量测定试剂盒

点击次数:215发布时间:2022/3/8 14:26:13

还原型抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)含量测定试剂盒

更新日期:2024/12/3 11:30:42

所 在 地:中国大陆

产品型号:

简单介绍:还原型抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)含量测定试剂盒

优质供应

详细内容

还原型抗坏血酸(ascorbic acidAsA)含量测定试剂盒说明书

                                                

                                                         分光光度法50/48

    意:正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

AsA又称维生素cAsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中重要的抗氧化剂,AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用,也是衡量农作物产品品质的重要指标。

 

测定原理:

在乙酸溶液中,抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼–2–羟基丁酰内酯衍生物,在大吸收波长420处测定吸光度。

 

自备仪器和用品:

研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液器和蒸馏水。

 

试剂组成和配制:

提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体4mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体6mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×2瓶(棕色),4℃避光保存。临用配制,每瓶加入7 mL蒸馏水充分溶解,用不完的试剂4℃下可保存3天。

1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。8000g4℃离心20min,取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3,间隔7,总时间3min);8000g4℃离心20min,取上清液置冰上混匀待测。

3.  血清等液体:直接测定。

 

AsA测定操作:

1. 分光光度计预热30 min,调节波长到420 nm,蒸馏水调零。

2. EP管中加入下列试剂

试剂名称(µL

测定管

空白管

样本

200

 

提取液

 

200

试剂一

60

60

试剂二

100

100

试剂三

240

240

1400

1400

混匀,25℃静置20min,吸取1mL加入1mL玻璃比色皿中,420nm下测定各管吸光值。ΔA=A测定-A

 

白。

注意空白管只需测定一次。

 

AsA含量计算公式:

标准曲线y = 0.0088x - 0.018 R2 = 0.9978

(1). 按蛋白浓度计算

AsA (μg/mg prot) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V÷Cpr×V样)

=113.63×(ΔA+0.018)÷Cpr

(2). 按样本质量计算

AsA(μg/g 鲜重) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V÷(W×V÷V样总)

=113.63×(ΔA+0.018)÷W

(3). 按细胞数量计算

AsA(μg/104 cell) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V÷(细胞数量×V÷V样总)

=113.63×(ΔA+0.018)÷细胞数量

4)按液体体积计算

AsA (μg/mL) =(ΔA+0.018)÷0.0088

=113.63×(ΔA+0.018)

V样:加入样品体积,0.2mLV样总:加入提取液体积1.0 mL; Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mLW:样品质量(g)。

 

注意事项:
试剂三现配现用,配制好的4℃保存,3天内使用完。

 

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