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H2S含量测定试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意：正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
H2S是一种新型气态信号分子，存在于脑内的神经递质，生理浓度的H2S对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用，并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。
测定原理：
H2S与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝，亚甲基蓝在665nm处有大吸收峰，通过测定其吸光值可计算H2S含量。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体32mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体16mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体16mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：液体2.5mL×1瓶，4℃避光保存。
样品处理：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3，间隔7，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清（浆）：直接测定
操作表（取2 mL离心管，按照下表操作）：
|
| 空白管 | 测定管 |
| 样品（μL） |
| 600 |
| H2O（μL） | 600 |
|
| 试剂一（μL） | 600 | 600 |
| 充分震荡混匀 | ||
| 试剂二（μL） | 600 | 600 |
| 10000g，4℃，离心10min，去上清，留沉淀 | ||
| H2O（μL） | 600 | 600 |
| 10000g，4℃，离心10min，去上清，留沉淀 | ||
| 试剂一（μL） | 300 | 300 |
| 试剂三（μL） | 300 | 300 |
| 充分震荡混匀 | ||
| 试剂四（μL） | 300 | 300 |
| 10000g，4℃，离心10min，取800μL上清加入1mL玻璃比色皿 | ||
| 试剂五（μL） | 40 | 40 |
| 混匀，25℃静置5min，测定665nm吸光值，记为A测定和A空白，ΔA=A测定-A空白。 | ||
H2S计算公式：
标准曲线回归方程为：y = 0.0044x，R2 = 0.9988
（1）组织样品
a.按照蛋白浓度计算
H2S（nmol/mg prot）=×V反总÷（V样×Cpr）=340.9×ΔA÷Cpr
b.按照样本重量计算
H2S（nmol/g鲜重）=×V反总÷（V样÷V样总×W）= 340.9×ΔA÷W
（2）液体样品
H2S（nmol/mL）=×V反总÷V样= 340.9×ΔA
(3) 细胞
H2S（nmol/104 cell）=×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量(万个)）=340.9×ΔA÷细胞数量（万个）
V反总：反应总体积，0.9mL；V样：反应中样品体积，0.6mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL
注意事项
低检出限为1nmol/mL。
