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丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量试剂盒

点击次数:171发布时间:2022/3/8 15:34:42

丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量试剂盒

更新日期:2024/12/3 11:30:42

所 在 地:中国大陆

产品型号:

简单介绍:丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量试剂盒

优质供应

详细内容


丙二醛(malondialdehydeMDA)含量试剂盒说明书

                                 分光光度法50/48

 

 

    意:正式测定务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:                                      

氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸,生成过氧化脂质后者逐渐分解为一系列复杂的化合物,其中包括MDA。通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。

 

测定原理:

MDA与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acidTBA)缩合,生成红色产物,在532nm有大吸收峰,进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量同时测定600nm下的吸光度,利用532nm600nm下的吸光度的差值计算MDA的含量。 

 

自备的仪器和用品:

可见分光光度、水浴、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰蒸馏水

 

试剂的组成和配置:

提取液:液体60mL×1瓶,4保存;

试剂一:液体40mL×1瓶,4保存;

注意事项:

临用注意试剂一是否完全溶解如未溶解,可以70-90加热,并振荡以促进溶解。

 

MDA提取 

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4离心10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g:提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4离心10min,取上清,置冰上待测。

2血清(浆)样品:直接检测。

 

测定步骤

1、吸取0.6mL 试剂一1.5mL离心管中,再加入0.2mL样本, 混匀。

295水浴中保温30min(盖紧,防止水分散失),置于冰浴中冷却,10000g25,离心10min

3、吸取上清液于1mL玻璃比色皿中,测定532nm600nm处的吸光度,记为A532A600ΔA= A532-A600

 

MDA含量计算

 

1、血清(浆)MDA含量的计算:

MDA含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V=25.8×ΔA 

2、细菌、细胞或动物组织中MDA含量计算

1)按照蛋白浓度计算

MDA含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V)=25.8× ΔA ÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

2)按照样品质量计算

MDA含量(nmol/g 鲜重)=[ ΔA×V反总÷(ε×d)×109(W ×V÷V样总)=25.8×ΔA ÷W

 (3 ) 按照细菌或细胞密度计算:

MDA含量(nmol/104)=[ ΔA×V反总÷(ε×d)×109(500×V÷V样总)=0.0516×ΔA

V反总:反应体系总体积, 8×10-4 Lε:丙二醛摩尔消光系数,155×103 L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.2 mLV样总:加入提取液体积,1 mLCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样质量,g500细胞或细菌总数,500万。

 

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