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过氧化氢含量(H2O2)试剂盒

点击次数:222发布时间:2022/3/8 15:50:41

过氧化氢含量(H2O2)试剂盒

更新日期:2024/10/16 15:41:56

所 在 地:中国大陆

产品型号:

简单介绍:过氧化氢含量(H2O2)试剂盒

优质供应

详细内容


过氧化氢含量H2O2试剂盒说明书 

 

分光光度法50/48

 

    正式测定取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

H2O2是生物体内常见的活性氧分子,主要由SODXOD催化产生,由CATPOD催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧,也是活性氧相互转化的枢纽。一方面,H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体;另一方面H2O2是许多氧化应急反应中的关键调节因子,。

 

测定原理:

H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物,在415nm有特征吸收

 

自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、丙酮60mL、浓盐酸10mL研钵

 

试剂的组成和配制

试剂一:丙酮60mL×1瓶,4保存;(自备)

试剂二:粉剂×1瓶,4保存;临用加入10mL浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂4保存;(溶解时间较长,约30min,可40-60℃加热溶解,务必提准备)

试剂三:15mL×1瓶,4保存;

试剂四:60mL×1瓶,4保存;

 

H2O2提取 

1细菌细胞样品的制备:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一)超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);用试剂一定容至1mL8000g 4离心10min,取上清,置冰上待测。

2. 组织样品的制备:按照组织质量(g:试剂一体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆;转移至EP管中,用试剂一定容至1mL8000g 4离心10min,取上清,置冰上待测。

3血清(浆)样品:直接检测。

 

测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至415nm,蒸馏水调零。

2、 将试剂二、三和四37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。

3、 EP管中按顺序加入下列试剂

 

试剂名称(μL

测定

对照

样本

吸取的量的为全部上清液

 

试剂一

 

1000

试剂二

100

100

试剂三

200

200

4000g25离心10min,弃上清,留沉淀

试剂四

1000

1000

加入试剂四溶解沉淀后,室温静置5min,倒入比色皿中测定415nm处吸光值A。对照管只要做一次即可。计算ΔAA测定-A对照。

 

注意事项

1由于试剂一易挥发,试剂一必须先预冷再加,研磨时必须在冰上研磨。

2本试剂盒中试剂的挥发性较高,请带一次性手套和口罩。

 

H2O2含量计算

1标准条件下测定的回归曲线,y = 0.7488x + 0.0006 (x标准品浓度μmol/mLyΔA)

2、血清(浆)H2O2含量的计算:

H2O2含量μmol/mLA-0.0006) ÷0.7488=1.34×(ΔA-0.0006)

3细菌、细胞或组织中H2O2含量计算

1)按照蛋白浓度计算

H2O2含量(μmol/mg prot)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(V1×Cpr)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

2)按照样质量计算

H2O2含量(μmol/g鲜重)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(W ×V1÷V2)= 1.34×(ΔA-0.0006W

 (3 ) 按照细菌或细胞密度计算:

H2O2含量(μmol/104)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0027×(ΔA-0.0006)

V1:加入反应体系中样本体积,1mLV2:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样质量,g500:细胞或细菌总数,500万。

注意:标曲线性范围为0.1μmol/mL2μmol/mL,吸光度ΔA线性范围为0.07-1.5ΔA超过1.5则需要稀释,计算公式乘以相应稀释倍数。

 

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