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过氧化氢含量(H2O2)试剂盒
点击次数:225发布时间:2022/3/8 15:50:41
更新日期:2024/10/16 15:41:56
所 在 地:中国大陆
产品型号:
优质供应
详细内容
过氧化氢含量(H2O2)试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意 :正式测定取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
H2O2是生物体内常见的活性氧分子,主要由SOD和XOD等催化产生,由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧,也是活性氧相互转化的枢纽。一方面,H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体;另一方面H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子,。
测定原理:
H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物,在415nm有特征吸收。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、丙酮60mL、浓盐酸10mL、研钵和冰。
试剂的组成和配制:
试剂一:丙酮60mL×1瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用加入10mL浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂4℃保存;(溶解时间较长,约30min,可40℃-60℃加热溶解,务必提准备)
试剂三:15mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:60mL×1瓶,4℃保存;
H2O2提取:
1、细菌或细胞样品的制备:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);用试剂一定容至1mL;8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2. 组织样品的制备:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆;转移至EP管中,用试剂一定容至1mL,8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至415nm,蒸馏水调零。
2、 将试剂二、三和四37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。
3、 在EP管中按顺序加入下列试剂
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
样本 | 吸取的量的为全部上清液 |
|
试剂一 |
| 1000 |
试剂二 | 100 | 100 |
试剂三 | 200 | 200 |
4000g,25℃离心10min,弃上清,留沉淀
试剂四 | 1000 | 1000 |
加入试剂四溶解沉淀后,室温静置5min,倒入比色皿中,测定415nm处吸光值A。对照管只要做一次即可。计算ΔA=A测定-A对照。
注意事项:
1、由于试剂一易挥发,试剂一必须先预冷再加,研磨时必须在冰上研磨。
2、本试剂盒中试剂的挥发性较高,请带一次性手套和口罩。
H2O2含量计算:
1、标准条件下测定的回归曲线,y = 0.7488x + 0.0006 (x为标准品浓度,μmol/mL;y为ΔA)。
2、血清(浆)中H2O2含量的计算:
H2O2含量(μmol/mL)=(ΔA-0.0006) ÷0.7488=1.34×(ΔA-0.0006)
3、细菌、细胞或组织中H2O2含量计算
(1)按照蛋白浓度计算
H2O2含量(μmol/mg prot)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(V1×Cpr)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷Cpr
需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
(2)按照样本质量计算
H2O2含量(μmol/g鲜重)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(W ×V1÷V2)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷W
(3 ) 按照细菌或细胞密度计算:
H2O2含量(μmol/104)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0027×(ΔA-0.0006)
V1:加入反应体系中样本体积,1mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500万。
注意:标曲线性范围为0.1μmol/mL到2μmol/mL,吸光度ΔA线性范围为0.07-1.5,若ΔA超过1.5则需要稀释,计算公式乘以相应稀释倍数。