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总巯基测定试剂盒

点击次数:230发布时间:2022/3/8 16:13:04

总巯基测定试剂盒

更新日期:2024/10/16 15:41:56

所 在 地:中国大陆

产品型号:

简单介绍:总巯基测定试剂盒

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优质供应

详细内容

 

总巯基测定试剂盒说明书

 

  分光光度法50/24

 

    :正式测定之选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质,而且参与活性氧清除,后者对于维持蛋白质构象具有重要作用通过测定总巯基含量和GSH含量,能够间接测定蛋白质巯基含量。

测定原理

巯基基团5,5’- 二硫代--硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在412nm处有大吸收峰。

自备实验用品

天平、研钵、可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL玻璃比色皿、乙醇和蒸馏水。

 

试剂组成和配制

试剂:液体40 mL×1瓶,4保存。

试剂:液体2 mL×1瓶,4避光保存。 

样品的制备:

1. 按照组织质量(g):水体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2. 血清,培养液:稀释5倍后测定,可取0.1mL样本,加入0.4mL蒸馏水,混匀,置冰上待测。

 

操作步骤

1、分光光度计预热30min,调节波长至412nm双蒸水调零

2操作表

1mL玻璃比色皿中加入如下试剂

 

对照管

测定管

样品μL

200

200

试剂一μL

750

750

试剂二μL

 

50

乙醇(μL

50

 

混匀,25℃静置10min 测定412nm吸光值ΔA=A测定-A对照。每个测定管设一个对照管。

 

计算公式

总巯基标准曲线:y =3.6222 x- 0.0037R2 = 1x为标品浓度,单位μmol/mLy为吸光度ΔA

1. 组织:

1)按样本重量计算

总巯基含量(μmol/g 鲜重=(ΔA+0.0037)÷3.6222 ×V样总÷W

=0.276×ΔA+0.0037)÷W

2)按样本蛋白浓度计算

 

总巯基含量(μmol/mg prot=(ΔA+0.0037)÷3.6222×V样总÷Cpr

=0.276×ΔA+0.0037)÷Cpr

2. 血清、培养液:

总巯基含量(μmol/L=(ΔA+0.0037)÷3.6222 ×5×103

=1380×ΔA+0.0037

V样总:加入提取液体积,1mLW:样品质量,g Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL5血清,培养液等液体样本稀释倍数;103 1mmol/L=103μmol/ L

 

注意事项

低检出限为10μmol/L

 

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联系人:邓强

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