91154 化学成分限定的T细胞培养基使用说明

IrvineScientific公司以来遵守严格的cGMP/医疗器械质量体系，IrvineScientific公司在细胞治疗培养基领域对"Chemically Defined"和“Animal Component Free”有着严格的定义：

"Chemically Defined"化学成分限定：指培养基中的组分是无动物源的，不含任何动物蛋白或者人血蛋白，如BSA/HAS,而且浓度是明确的。

"Animal Component Free"无动物源成分 ：指不能有人或者动物来源的成分，并且只能使用植物或细菌产生的重组蛋白而不能使用来自动物或昆虫细胞表达的蛋白。

     Irvine Scientific公司研发团队开发了一系列的cGMP细胞治疗培养基以支持细胞治疗产业的应用，包括

- shou个无血清、无动物源、化学成分限定的T细胞培养基（货号91154）

- shou个无血清、无动物源、化学成分限定的NK细胞培养基（货号91215）

- 新一代无血清、无动物源、化学成分限定的DC培养基（货号91146）

- 新一代无血清、化学成分限定的悬浮293细胞培养基（货号91165）

- 无蛋白、无动物源、化学成分限定的细胞冻存液（货号91139）

-无蛋白、无动物源、无DMSO、化学成分限定的细胞冻存液（货号91140）

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91154 化学成分限定的T细胞培养基使用说明

存储说明和稳定性

使用无菌技术处理以避免污染。 储存在2-8oC，避光，直到准备使用。 该产品在原始包装下在2-8oC下稳定，从1L PET瓶制造之日起14个月。 打开后，产品应在2-8oC的黑暗中储存，并在4周内使用。 请勿在的到期日后使用。 未经验证可在超过未开封的保质期内使用。

制备用于T细胞活化的平板

1. 用浓度为1μg/ mL的抗人CD3（克隆UCHT1）和抗人CD28（克隆CD28.2）抗体在37℃oC下涂覆2小时或在2-8℃下过夜oC用Parafilm®来防止蒸发。
2. 吸出涂层溶液。
3. 在加入细胞之前用PBS洗涤两次。

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制备T细胞

1. 在使用前，在37oC下平衡足够量的PRIME-XV T细胞CDM至少15分钟。
2. 通过在37oC水浴中温和搅拌小瓶1分钟，解冻新鲜的冷冻保存的PBMC小瓶。
3. 小心地将小瓶的全部内容物转移到含有预热的10mL PRIME-XV T Cell CDM的15mL锥形管中。
4. 将细胞以200g旋转10分钟。
5. 小心吸出上清液，留下覆盖细胞沉淀的*小体积的培养基。
6. 补充PRIME-XV T细胞CDM，相当于200 U / mL（11,000 IU / mL）的IL-2。
7. 用补充的PRIME-XV T细胞CDM重悬细胞沉淀，并将细胞以100,000细胞/ mL的密度转移到包被的平板上。
8. 将细胞在37℃oC和5％CO 孵育。
9. 每2至3天培养，用含有相当于200U / mL（11,000IU / mL）IL-2的PRIME-XV T细胞CDM进食。 饲料量应至少为原始培养体积的70％。

注意：应根据细胞密度和生长情况调整摄食事件和体积的频率，以避免过度融合。

收获T细胞

1. 使用细胞刮刀轻轻地从培养皿中取出T细胞。
2. 用温度平衡的PRIME-XV T Cell CDM洗涤。
3. 细胞准备好进行分析，存储或重新种植。

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G-Rex 6孔培养板中T细胞扩增的方案

第0天：T细胞的电镀和活化

1. 在使用前，在37℃下平衡足够量的PRIME-XV T Cell CDM至少15分钟。注意：为避免温度循环，请确定平衡前所需的总体积。
2. 将小瓶在37°C水浴中轻轻搅拌1分钟，解冻一小瓶冷冻细胞。 或者，使用新鲜分离或收获的细胞。
3. 小心地将小瓶的全部内容物转移到含有10mL PRIME-XV T Cell CDM的15mL锥形管中。
4. 将细胞以200g旋转10分钟。
5. 小心吸出上清液，留下覆盖细胞沉淀的*小体积的培养基。
6. 补充适当体积的PRIME-XV T细胞CDM，相当于200 U / mL（11,000 IU / mL）的IL-2。
7. 将5×106PBMCs /孔置于35mL培养基中。
8. 添加以下可溶性激活抗体：

LEAF纯化的抗人CD3浓度为10μg/ mL（克隆UCHT1）LEAF纯化的抗人CD28浓度为5μg/ mL（克隆CD28.2）

1. 将细胞在37℃和5％CO2的培养箱中孵育。

第3天：继续刺激

1. 以200 U / mL（11,000 IU / mL）添加额外的IL-2。

第7天：媒体交流

1. 通过从井的顶部边缘缓慢移液，移除25mL废介质，小心避免意外吸入细胞。
2. 轻轻旋转或重新悬浮剩余的液体，使细胞均匀分散细胞计数。
3. 加入30 mL新鲜培养基补充剂，IL-2，200 U / mL（11,000 IU / mL）。

第10天：继续刺激

1. 以200 U / mL（11,000 IU / mL）添加额外的IL-2。第14天：收获细胞
2. 通过从井的顶部边缘缓慢移液，移除25mL废介质，小心避免意外吸入细胞。
3. 轻轻旋转或重新悬浮剩余的液体，使细胞均匀分散细胞计数。
4. 以剩余体积收获细胞。

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