近年来，肿瘤免疫治疗技术突飞猛进，以嵌合抗原受体修饰T细胞（CAR-T）为代表的基因修饰细胞产品陆续进入临床。细胞治疗类产品获得的突破性进展和国外CAR-T细胞治疗产品的批准上市，为晚期肿瘤患者的治疗带来新希望。国内多家CAR-T获得临床试验批件，为了临床应用的正常，安全，有序的开展，相应的细胞治疗的法规也越来严格。在细胞培养过程中，应尽量避免使用动物或人来源的物质，比如应尽量避免血清的使用，培养基应该质量界别的培养基。Irvine Scientific

 91154 CAR-T细胞培养基是shou个无血清、无动物源、化学成分限定的T细胞培养基 。PRIME-XV®T cell CDM无疑是T细胞治疗领域（尤其是CAR-T细胞治疗）的趋势培养基。

91154 CAR-T细胞培养基订购信息

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PRIME-XV®T cell CDM

化学成分限定的T细胞培养基 91154 1L/瓶 2～8℃

91154 CAR-T细胞培养基产品特点

1. 无血清成分
2. 无异种蛋白
3. 化学成分明确
4. 不需要额外添加血清或者白蛋白，支持T细胞体外活化及扩增培养；
5. T细胞（CAR-T）培养性能明显优于市面上的无血清培养基；
6. GMP条件下生产以及DMF备案

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91154 CAR-T细胞培养基提供性能

1. 在平板、细胞培养袋和G-Rex中支持活跃的T细胞生长，同时维护其功能
2. 提供批量到批次的*性。
3. 消除未定义成分对T细胞表型的影响
4. 支持目标T细胞类型(如Th)的极化1T调节细胞

制备用于T细胞活化的平板

1. 用浓度为1μg/ mL的抗人CD3（克隆UCHT1）和抗人CD28（克隆CD28.2）抗体在37℃oC下涂覆2小时或在2-8℃下过夜oC用Parafilm®来防止蒸发。
2. 吸出涂层溶液。
3. 在加入细胞之前用PBS洗涤两次。

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制备T细胞

1. 在使用前，在37oC下平衡足够量的PRIME-XV T细胞CDM至少15分钟。
2. 通过在37oC水浴中温和搅拌小瓶1分钟，解冻新鲜的冷冻保存的PBMC小瓶。
3. 小心地将小瓶的全部内容物转移到含有预热的10mL PRIME-XV T Cell CDM的15mL锥形管中。
4. 将细胞以200g旋转10分钟。
5. 小心吸出上清液，留下覆盖细胞沉淀的*小体积的培养基。
6. 补充PRIME-XV T细胞CDM，相当于200 U / mL（11,000 IU / mL）的IL-2。
7. 用补充的PRIME-XV T细胞CDM重悬细胞沉淀，并将细胞以100,000细胞/ mL的密度转移到包被的平板上。
8. 将细胞在37℃oC和5％CO 孵育。
9. 每2至3天培养，用含有相当于200U / mL（11,000IU / mL）IL-2的PRIME-XV T细胞CDM进食。 饲料量应至少为原始培养体积的70％。

注意：应根据细胞密度和生长情况调整摄食事件和体积的频率，以避免过度融合。

收获T细胞

1. 使用细胞刮刀轻轻地从培养皿中取出T细胞。
2. 用温度平衡的PRIME-XV T Cell CDM洗涤。
3. 细胞准备好进行分析，存储或重新种植。

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G-Rex 6孔培养板中T细胞扩增的方案

第0天：T细胞的电镀和活化

1. 在使用前，在37℃下平衡足够量的PRIME-XV T Cell CDM至少15分钟。注意：为避免温度循环，请确定平衡前所需的总体积。
2. 将小瓶在37°C水浴中轻轻搅拌1分钟，解冻一小瓶冷冻细胞。 或者，使用新鲜分离或收获的细胞。
3. 小心地将小瓶的全部内容物转移到含有10mL PRIME-XV T Cell CDM的15mL锥形管中。
4. 将细胞以200g旋转10分钟。
5. 小心吸出上清液，留下覆盖细胞沉淀的*小体积的培养基。
6. 补充适当体积的PRIME-XV T细胞CDM，相当于200 U / mL（11,000 IU / mL）的IL-2。
7. 将5×106PBMCs /孔置于35mL培养基中。
8. 添加以下可溶性激活抗体：

LEAF纯化的抗人CD3浓度为10μg/ mL（克隆UCHT1）LEAF纯化的抗人CD28浓度为5μg/ mL（克隆CD28.2）

1. 将细胞在37℃和5％CO2的培养箱中孵育。

第3天：继续刺激

1. 以200 U / mL（11,000 IU / mL）添加额外的IL-2。

第7天：媒体交流

1. 通过从井的顶部边缘缓慢移液，移除25mL废介质，小心避免意外吸入细胞。
2. 轻轻旋转或重新悬浮剩余的液体，使细胞均匀分散细胞计数。
3. 加入30 mL新鲜培养基补充剂，IL-2，200 U / mL（11,000 IU / mL）。

第10天：继续刺激

1. 以200 U / mL（11,000 IU / mL）添加额外的IL-2。第14天：收获细胞
2. 通过从井的顶部边缘缓慢移液，移除25mL废介质，小心避免意外吸入细胞。
3. 轻轻旋转或重新悬浮剩余的液体，使细胞均匀分散细胞计数。
4. 以剩余体积收获细胞。

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