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色谱柱在使用前要进行活化操作
点击次数：12 发布时间：2024/4/24 14:18:09
色谱柱在使用前要进行活化操作
色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。多为金属或玻璃制作。有直管形、盘管形、U形管等形状。液相色谱通常均采用填充柱。
色谱柱的分离效果取决于所选择的固定相，以及色谱柱的制备和操作条件。
色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球（包括离子交换树脂）、多孔碳等，其粒度一般为3,5,7,10μm等，柱效理论值可达5~16万/米。对于一般的分析只需5000塔板数的柱效；对于同系物分析，只要500即可；对于较难分离物质对则可采用高达2万的柱子，因此一般10~30cm左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。
液相色谱柱的活化操作，以常见的C18反相分析柱为例，出厂时一般都封装有甲醇或乙腈等有机溶剂。随着时间的推移，色谱柱内的有机溶剂缓慢挥发，色谱柱内可能出现气泡。因此，新购买的色谱柱在使用前一般都要进行活化操作。
下面以常见的4.6mmX150mm,5μm粒径的C18反相分析柱为例：
1.在活化色谱柱前，应先用相关试剂冲洗液相系统的流路，确保无污染物残留。切换至封柱试剂（一般为甲醇或乙腈），置换流路内的试剂。
2.停泵，将分析柱的进液口连上系统，移除出液口的堵头，出液口不连上系统。倾斜放置色谱柱，使其出液口高于入液口。
3.以0.1ml/min的流速冲洗色谱柱约5分钟，切换至0.2ml/min的流速继续冲洗。观察色谱柱出液口，若连续出液，停泵，将色谱柱出液口接入液相系统。
4.以0.1ml/min的流速冲洗色谱柱，5分钟内将流速平稳提升至0.5ml/min继续冲洗色谱柱。
5.以0.5ml/min的流速冲洗色谱柱，期间观察压力与基线是否平稳，直到冲洗的总流量达到30个柱体积。
6.活化完成。
对于久置不用的类似型号色谱柱，再次使用前也可参考上述步骤进行活化。
原创作者：上海精瑞科学仪器有限公司
