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技术文章
类胡萝卜素(Carotenoid)检测试剂盒(比色法)
点击次数:10 发布时间:2024/1/2 10:31:53
类胡萝卜素(Carotenoid)检测试剂盒(比色法)
产品货号:BA1646
产品规格:50T
产品简介:
叶绿体是光合作用的细胞器,在光合作用研究中,常需要用提取的叶绿体展开下游研究工作。叶绿体中所含的色素主要有两大类,叶绿素(包括叶绿素a和叶绿素b)和类胡萝卜素(包括胡萝卜素和叶黄素),它们与类囊体膜上的蛋白质结合,成为色素蛋白复合体,其中叶绿素又称叶绿体色素(Chlorophyll)。类胡萝卜素是一种脂溶性且具有营养特性的化合物,给植物和动物提供天然色素,是重要的抗氧化剂,并有能力转换为必需维生素。类胡萝卜素可预防细胞,组织和基因损毁,增强身体免疫系统,抵御感染,减少癌症风险,保护心脏。
类胡萝卜素(Carotenoid)检测试剂盒(比色法)检测原理是类胡萝卜素不溶解于水,而溶于有机溶剂,以有机溶剂粗提类胡萝卜素,根据朗伯-比尔定律,某有色溶液的吸光度(A)与其中溶质浓度(C)和液层厚度(L)成正比,即 A=αCL,其中α为比例常数,当溶液浓度以百分比浓度为单位,层液厚度为1cm时,α为该物质的吸光系数。在本试剂盒情况下,叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素在665nm 、649nm、470nm处有吸收波,根据经验公式可计算出叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素、类胡萝卜素含量。该试剂盒主要用于植物组织中叶绿素、类胡萝卜素的提取以及以分光光度计定量检测叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素、类胡萝卜素含量。该试剂仅用于科研域,不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
产品名称 | 50T | 保存条件 |
试剂(A): Carotenoid Assay buffer | 530ml | 室温 |
试剂(B): 提取粉剂 | 3g | 室温 |
自备材料:
1. 研钵或匀浆器
2. 离心管
3. 滤纸或纱布
4. 比色杯、分光光度计
操作步骤 (仅供参考) :
1. 类胡萝卜素提取:
①取菠菜或其他植物新鲜叶片,洗净,擦干,去中脉,称取剪碎的新鲜样品0.1g,置于研钵或匀浆器,加入少量提取粉剂(约50mg)和1ml Carotenoid Assay buffer,研磨或匀浆成液态。
②将研磨液或匀浆液转移至10ml离心管,用少量Carotenoid Assay buffer冲洗研钵或匀浆器数次,连残渣一同倒入10ml离心管,补加Carotenoid Assay buffer至10ml,混匀,避光放置5min-2h。
(注:也可将组织剪碎,加入Carotenoid Assay buffer,避光放置12~36h,期间晃动数次,使组织与提取试剂充分接触,当组织接近白色,即表示色素提取完成,可直接进行测定。)
2. 观察底部组织残渣接近于白色,即为提取,如果仍有较多组织颜色,应再加入Carotenoid Assay buffer继续避光放置。
3. 滤纸或三层纱布过滤,留取滤液,即为类胡萝卜素粗提液。
4. Carotenoid测定:取类胡萝卜素粗提液加入光径为1cm的比色杯,以Carotenoid Assay buffer调零,分光光度计测定粗提液在665nm、649nm、470nm处吸光度(A665、A649、A470)。
计 算:
叶绿素a含量(mg/g)=Ca×V×N/(W×1000)
叶绿素b含量(mg/g)=Cb×V×N/(W×1000)
总叶绿素含量(mg/g)=CT ×V×N/(W×1000)
类胡萝卜素含量(mg/g)=CC×V×N/(W×1000)
式中:Ca=13.95×A665-6.88×A649(mg/L)
Cb=24.96×A649-7.32×A665(mg/L)
CT=6.63×A665+18.08×A649(mg/L)
CC=(1000×A470-2.05×Ca -114.8×Cb)/245(mg/L)
=(1000×A470-2851.304×A649+811.7385×A665)/245(mg/L)
V=类胡萝卜素粗提液体积(ml)=10(ml)
N=稀释倍数
W=样品鲜重或干重(g)
1000=ml与L的单位换算
注意事项:
1. 为避免叶绿素和类胡萝卜见光分解,操作时应尽量避光,研磨或匀浆时应尽量缩短时间。
2. 测定吸光度值大于1时,可适当稀释后再行测定。
3. Carotenoid Assay buffer易挥发,不用时需拧紧瓶盖。
4. 色素粗提液不能出现浑浊现象,否则应重新过滤。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:12个月有效。
原创作者:上海尚宝生物科技有限公司