类胡萝卜素（Carotenoid）检测试剂盒（微板法）

产品货号：BA1645

产品规格：100T

产品简介：

叶绿体是光合作用的细胞器，在光合作用研究中，常需要用提取的叶绿体展开下游研究工作。叶绿体中所含的色素主要有两大类，叶绿素(包括叶绿素a和叶绿素b)和类胡萝卜素(包括胡萝卜素和叶黄素)，它们与类囊体膜上的蛋白质结合，成为色素蛋白复合体，其中叶绿素又称叶绿体色素(Chlorophyll)。类胡萝卜素是一种脂溶性且具有营养特性的化合物，给植物和动物提供天然色素，是重要的抗氧化剂，并有能力转换为必需维生素。类胡萝卜素可预防细胞，组织和基因损毁，增强身体免疫系统，抵御感染，减少癌症风险，保护心脏。

类胡萝卜素(Carotenoid)检测试剂盒(微板法)检测原理是类胡萝卜素不溶解于水，而溶于有机溶剂，以有机溶剂粗提类胡萝卜素，根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度(A)与其中溶质浓度(C)和液层厚度(L)成正比，即 A=αCL，其中α为比例常数，当溶液浓度以百分比浓度为单位，层液厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。在本试剂盒情况下，叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素在665nm 、649nm、470nm处有吸收波，根据经验公式可计算出叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素、类胡萝卜素含量。该试剂盒主要用于植物组织中叶绿素、类胡萝卜素的提取以及以分光光度计定量检测叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素、类胡萝卜素含量。该试剂仅用于科研域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1. 研钵或匀浆器

2. 离心管

3. 滤纸或纱布

4. 96孔板、酶标仪

操作步骤 (仅供参考) ：

1. 类胡萝卜素提取：

①取菠菜或其他植物新鲜叶片，洗净，擦干，去中脉，称取剪碎的新鲜样品0.1g，置于研钵或匀浆器，加入少量提取粉剂(约50mg)和1ml Carotenoid Assay buffer，研磨或匀浆成液态。

②将研磨液或匀浆液转移至10ml离心管，用少量Carotenoid Assay buffer冲洗研钵或匀浆器数次，连残渣一同倒入10ml离心管，补加Carotenoid Assay buffer至10ml，混匀，避光放置5min-2h。

（注：也可将组织剪碎，加入Carotenoid Assay buffer，避光放置12~36h，期间晃动数次，使组织与提取试剂充分接触，当组织接近白色，即表示色素提取完成，可直接进行测定。）

2. 观察底部组织残渣接近于白色，即为提取，如果仍有较多组织颜色，应再加入Carotenoid Assay buffer继续避光放置。

3. 滤纸或三层纱布过滤，留取滤液，即为类胡萝卜素粗提液。

4. Carotenoid测定：取类胡萝卜素粗提液加入96孔板，以Carotenoid Assay buffer调零，酶标仪测定粗提液在665nm、649nm、470nm处吸光度(A₆₆₅、A₆₄₉、A₄₇₀)。

计 算：

叶绿素a含量(mg/g)=C_a×V×N/(W×1000)

叶绿素b含量(mg/g)=C_b×V×N/(W×1000)

总叶绿素含量(mg/g)=C_T ×V×N/(W×1000)

类胡萝卜素含量(mg/g)=C_C×V×N/(W×1000)

式中：C_a=13.95×A₆₆₅-6.88×A₆₄₉(mg/L)

C_b=24.96×A₆₄₉-7.32×A₆₆₅(mg/L)

C_T=6.63×A₆₆₅+18.08×A₆₄₉(mg/L)

C_C=(1000×A₄₇₀-2.05×C_a -114.8×C_b)/245(mg/L)

=(1000×A₄₇₀-2851.304×A₆₄₉+811.7385×A₆₆₅)/245(mg/L)

V=类胡萝卜素粗提液体积(ml)=10(ml)

N=稀释倍数

W=样品鲜重或干重(g)

1000=ml与L的单位换算

注意事项：

1. 为避免叶绿素和类胡萝卜见光分解，操作时应尽量避光，研磨或匀浆时应尽量缩短时间。

2. 测定吸光度值大于1时，可适当稀释后再行测定。

3. Carotenoid Assay buffer易挥发，不用时需拧紧瓶盖。

4. 色素粗提液不能出现浑浊现象，否则应重新过滤。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司