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技术文章
DNA退火缓冲液(5×)
点击次数:21 发布时间:2024/1/22 10:40:47
产品货号:R21943
产品包装:1ml/5ml
产品简介:
DNA寡核苷酸退火缓冲液(Annealing Buffer for DNA Oligos)简称为DNA退火缓冲液,是一种可用于DNA oligo退火的缓冲液,可用于常规的DNA oligo的退火,尤其适合于较难退火的用于RNAi (也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。由于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列,自身易形成发夹结构,从而影响两条DNA oligo的正确退火。
尚宝生物 Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)能有效避免DNA oligo自身形成发夹结构,并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接,转化后可以得到大量的阳性克隆。该本试剂操作简单,只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNAOligos(5×)按照一定比例混合后,置于PCR仪上进行程序降温,约90min即可完成。
产品组成:
试剂名称 | 规格 | 保存温度 |
试剂(A): Annealing Buffer for DNAOligos(5×) | 1ml | -20℃ |
试剂(B): Nuclease-Free Water | 5ml | 室温 |
操作步骤(仅供参考):
1. 把待退火的DNA oligo 用经灭菌的超纯水或 Nuclease-Free Water 配制成 50μM,同
时溶解 Annealing Buffer for DNA Oligos(5×),混匀备用。
2. 按如下退火反应体系操作:
Nuclease-Free Water | Tatal4 |
Annealing Buffer for DNA | 0μl |
Oligos(5×) | 20μl |
DNA oligo A(50μM) | 20μl |
DNA oligo B(50μM) | 20μl |
按照上述顺序,依次加入并混匀,如果所用 PCR 仪没有加热盖,可加入 Mineral Oil 防止
液体挥发。
3. 按如下 PCR 仪的退火条件:
步骤 | 温度 | 时间 | 作用 |
1 | 95℃ | 2min | Oligo充分变性 |
2 | 每90s下降1℃,降至25℃ | 约90min | 程序退火 |
3 | 4℃ | 保存 | 暂时存放 |
4. 退火后可直接用于连接反应,也可以-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等
其它反应,纯化试剂盒进行纯化,或者确保退火产物在反应体系中体积不超过 5%,
以避免 Annealing Buffer 对后续的酶反应体系的干扰。
注意事项:
1. 避免反复冻融,以免效率下降。
2. 该试剂只适合于DNA oligo的退火,不适用于RNA oligo的退火。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件:
-20℃,12个月有效。
原创作者:上海尚宝生物科技有限公司