SDS裂解液

目录编号：T16008

产品规格：100ml

产品简介：

    多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，例如Triton、SDS、NP-40等。SDS裂解液 (SDS Lysis Buffer)是一种其强烈的细胞组织快速裂解液并获得总蛋白质。其裂解液强度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(弱)、RIPA 裂解液(中)、通用细胞裂解液、Western及IP细胞裂解液，所获得的蛋白质可以用于Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等。

尚宝生物 SDS Lysis Buffer主要由Tris-HCl、NaCl、SDS等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

产品组成：

注：自备PMSF溶液（100mM ）（可参考尚宝P2010）。

操作步骤：（仅供参考）

(一)贴壁培养细胞

1. 取SDS Lysis Buffe室温溶解混匀，使用取适量裂解液加入PMSF，使终浓度为1mM。

2. 去除贴壁细胞的培养液，用PBS、NS或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。

3. 按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例加入SDS Lysis Buffer。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液作用于细胞1～3s 内，细胞就会被裂解。如果是所提蛋白样品用于CHIP, 应置于冰上或4℃裂解15～30min。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～250μl。

4. 10000～12000g，4℃离心5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

5. 进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。

(二)悬浮培养细胞

1. 取SDS Lysis Buffer置于室温溶解混匀后，使用取适量裂解液加入PMSF，使其终浓度为1mM。

2. 低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。

3. 用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例，加入SDS Lysis Buffer。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞，充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。通常裂解液作用于细胞1～3s内，细胞就会被裂解。如果是所提蛋白样品用于 CHIP, 置于冰上或 4℃裂解 15～30min。

4. 10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

5. 进行后续的 Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。

(三)组织样本 

1. 取SDS Lysis Buffer置于室温溶解混匀，使用取适量裂解液加入PMSF，使其终浓度为1mM。

2. 把组织剪切成细小的碎片，越小越好。

3. 取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在1～2min之内，以减少蛋白的降解。

4. 按20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15～30min。如果是所提蛋白样品用于CHIP,置于冰上或4℃继续裂解10～20min。

5. 步骤3、4亦可以采用如下过程：按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的SDS Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，过程尽量控制1～2min之内，以减少蛋白的降解。如果是所提蛋白样品用于CHIP, 应置于冰上或4℃继续裂解10～20min。

6. 10000～12000g，4℃离心5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

7. 进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。

注意事项 ：

1. 去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。

2. 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

3. 在培养细胞的裂解中，如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/离心管，然后再裂解。少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。

4. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

5. 溶解SDS Lysis Buffer时，应尽量缩短溶解时间，避免裂解液中的有效成分失效。

6. 细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或4℃进行。

有效期：12个月有效。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司