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技术文章
SP(小鼠/兔IgG)-POD Kit说明书
点击次数:18 发布时间:2024/8/12 10:45:58
产品货号:M20313 产品规格:3ml/6ml/18ml 产品简介: 本试剂盒适合于一抗为小鼠/兔IgG的免疫组化实验DAB显色。SP试剂盒是为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。 产品组成: 封闭液(正常山羊血清) 3ml 6ml 18ml 3% H2O2 3ml 6ml 18ml Bio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液 60ul 120ul 360ul 链酶亲和素-POD浓缩液 30ul 60ul 180ul 稀释液 10ml 20ml 60ml 20×DAB显色液A 0.3ml 0.6ml 1.8ml 20×DAB显色液B 0.3ml 0.6ml 1.8ml 操作步骤:(以石蜡切片为例) 1. 切片常规脱蜡至水(三次二甲苯,三次乙醇)。 2. 3% H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。 3. 可选步聚: a. 热修复抗原,将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。 b. 酶消化,滴加消化液,37℃10分钟,PBS(pH7.2-7.4)洗涤2-3次。 c. 跳过此步,直接进入下一步。 4. 滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,免洗。 5. 用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。) 6. 根据用量,用稀释液将Bio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ulBio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠/兔IgG工作液,20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。 7. 根据使用量,用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul链酶亲和素-POD浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液,20-37℃,30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5分钟。 8. DAB显色:根据用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1ml PBS加入50ul 20×DAB显色液A,加入50ul 20×DAB显色液B 。充分混匀后滴加到切片上。室温显色,镜下控制反应时间,一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。 苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。 对于细胞爬片,固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Triton X-100 室温孵育20分钟,PBS漂洗两次,3% H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次,接上述第4步。对于冰冻切片,固定后,PBS漂洗两次,接上述第二步。 注意事项: 如果染色背景过高,在SP反应之后,DAB显色之,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后DAB显色。 保存: 如果长时间不使用,请将所有试剂存放于-20℃,如经常使用,可将封闭液,3% H2O2和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。 产品货号:M20313 产品规格:3ml/6ml/18ml 产品简介: 本试剂盒适合于一抗为小鼠/兔IgG的免疫组化实验DAB显色。SP试剂盒是为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。 产品组成: 封闭液(正常山羊血清) 3ml 6ml 18ml 3% H2O2 3ml 6ml 18ml Bio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液 60ul 120ul 360ul 链酶亲和素-POD浓缩液 30ul 60ul 180ul 稀释液 10ml 20ml 60ml 20×DAB显色液A 0.3ml 0.6ml 1.8ml 20×DAB显色液B 0.3ml 0.6ml 1.8ml 操作步骤:(以石蜡切片为例) 1. 切片常规脱蜡至水(三次二甲苯,三次乙醇)。 2. 3% H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。 3. 可选步聚: a. 热修复抗原,将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。 b. 酶消化,滴加消化液,37℃10分钟,PBS(pH7.2-7.4)洗涤2-3次。 c. 跳过此步,直接进入下一步。 4. 滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,免洗。 5. 用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。) 6. 根据用量,用稀释液将Bio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ulBio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠/兔IgG工作液,20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。 7. 根据使用量,用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul链酶亲和素-POD浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液,20-37℃,30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5分钟。 8. DAB显色:根据用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1ml PBS加入50ul 20×DAB显色液A,加入50ul 20×DAB显色液B 。充分混匀后滴加到切片上。室温显色,镜下控制反应时间,一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。 苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。 对于细胞爬片,固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Triton X-100 室温孵育20分钟,PBS漂洗两次,3% H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次,接上述第4步。对于冰冻切片,固定后,PBS漂洗两次,接上述第二步。 注意事项: 如果染色背景过高,在SP反应之后,DAB显色之,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后DAB显色。 保存: 如果长时间不使用,请将所有试剂存放于-20℃,如经常使用,可将封闭液,3% H2O2和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。
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