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技术文章

新型转染试剂(NanoEnter)

点击次数:32 发布时间:2024/8/26 14:38:34

 新型转染试剂(NanoEnter

产品货号:T16622

 

产品规格:1ml/4×1ml

 

产品介绍

NanoEnter Transfection Reagent是一种采用纳米技术合成的生物可降解的高性能转染试剂,不含动物来源组分。该纳米聚合物可快速地与DNA形成稳定的复合物,通过细胞膜进入到细胞内,整个转染过程快速、、低毒、重复性好。

 

产品特色:

1. 适用于多种细胞系的转染,结果重复性好

2. 细胞毒性低,转染复合物添加后,不需要更换培养基

3. 可瞬时及稳定转染

4. 血清和抗生素耐受性高,培养基可含或不含血清和抗生素

5. 操作简单,NanoEnter-DNA复合物孵育5min即可转染

 

操作步骤:

12孔板为例:

1. 转染用细胞准备:转染接种细胞于合适的容器中,培养约24h,细胞密度70%-90%为宜,确保细胞处于状态

2. 1µg质粒DNA100µl合适的稀释液(如Opti-MEM,无血清DMEM150mM NaCl溶液),质粒终浓度为0.01µg/µl, 轻柔混匀制备DNA稀释液。

★ 注意:需先稀释DNA,且质粒终浓度为0.01µg/µl,再加入NanoEnter转染试剂,不可颠倒顺序,否则会显著降低转染效率。

3. 2µl NanoEnter Transfection Reagent直接添加至含DNA的稀释液中,轻柔混匀。

★ 注意:一般细胞系的NanoEnterDNA比例为2:13:1间获得较高的转染效率,研究者根据自己的细胞系,在 NanoEnterDNA=2:13:14:15:1优化,获得转染效率。

4. 在室温条件下孵育转染试剂NanoEnter:DNA复合物5分钟,转染复合物即可制备完成。

★ 注意:NanoEnter Transfection Reagent可与DNA分子快速形成复合物,通常5分钟孵育时间即可完成。某些情况下(如特殊细胞类型及稀释比率等),需要延长孵育时间,长为20分钟,根据您的特殊细胞系类型及稀释比率不同来优化孵育时间。

5. 取出细胞培养皿,无需弃去生长的培养基,将NanoEnter Transfection Reagent-DNA复合物逐滴加至细胞中。

★ 注意:NanoEnter Transfection Reagent对血清和抗生素耐受性高,含抗生素的培养基对转染效率影响不大。

6. 转染后,培养细胞18-72小时后对细胞进行鉴定或加入抗生素筛选稳定克隆。

★ 注意:不同细胞系对本转染试剂的敏感度不一样,如果有明显的细胞毒性等情况发生,请转染后4-6小时更换培养基。

 

不同培养皿中NanoEnterDNA复合物的建议使用量

培养基

表面积

培养基体积

稀释液体积

DNA

NanoEnter(2:1比率) )

96孔板

0.3cm2

100µl

10µl

0.1µg

0.2µl

48孔板

1.0cm2

200µl

30µl

0.3µg

0.6µl

24孔板

1.9cm2

500µl

50µl

0.5µg

1.0µl

12孔板

3.8cm2

1ml

100µl

1µg

2µl

6孔板

9.4cm2

2ml

200µl

2µg

4µl

60mm培养皿

21cm2

5ml

500µl

5µg

10µl

10cm培养皿

55cm2

10ml

1000µl

10µg

20µl

注意:稀释液的体积根据质粒的量确定,浓度为 0.01µg/µl,低于此浓度会显著降低转染率

 

保存条件:

常温运输,4℃保存, 有效期12月(不可冻融)。

 

常见问题:

问题

可能原因

建议

转染率低

非优化的NanoEnter

DNA比率

不同细胞系,可按NanoEnterDNAN/P =2:1,3:1, 4:1, 5:1)的比率优化

细胞密度太高或太低

针对不同细胞系,确定密度;对多数细胞类型来说,一般70-90%汇合度为。

NanoEnterDNA复合物

形成不佳

在无血清培养基中制备复合物(如:Opti-MEM

培养基中的抑制成分

某些培养基成分会降低转染效率

细胞毒性高

DNA纯度不高

使用高纯度、无菌、无污染的DNA经行转染

对于细胞来说,转染复

合物过多

增加培养板中细胞数量,或降低复合物的含量

转染蛋白具有细胞毒性

避免表达的蛋白可能对细胞的毒性

 

原创作者:上海尚宝生物科技有限公司

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