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技术文章
新型转染试剂(NanoEnter)
点击次数:32 发布时间:2024/8/26 14:38:34
新型转染试剂(NanoEnter)
产品货号:T16622
产品规格:1ml/4×1ml
产品介绍:
NanoEnter Transfection Reagent是一种采用纳米技术合成的生物可降解的高性能转染试剂,不含动物来源组分。该纳米聚合物可快速地与DNA形成稳定的复合物,通过细胞膜进入到细胞内,整个转染过程快速、、低毒、重复性好。
产品特色:
1. 适用于多种细胞系的转染,结果重复性好
2. 细胞毒性低,转染复合物添加后,不需要更换培养基
3. 可瞬时及稳定转染
4. 血清和抗生素耐受性高,培养基可含或不含血清和抗生素
5. 操作简单,NanoEnter-DNA复合物孵育5min即可转染
操作步骤:
以12孔板为例:
1. 转染用细胞准备:转染接种细胞于合适的容器中,培养约24h,细胞密度70%-90%为宜,确保细胞处于状态
2. 将1µg质粒DNA用100µl合适的稀释液(如Opti-MEM,无血清DMEM或150mM NaCl溶液),质粒终浓度为0.01µg/µl, 轻柔混匀制备DNA稀释液。
★ 注意:需先稀释DNA,且质粒终浓度为0.01µg/µl,再加入NanoEnter转染试剂,不可颠倒顺序,否则会显著降低转染效率。
3. 将2µl NanoEnter Transfection Reagent直接添加至含DNA的稀释液中,轻柔混匀。
★ 注意:一般细胞系的NanoEnter:DNA比例为2:1或3:1间获得较高的转染效率,研究者根据自己的细胞系,在 NanoEnter:DNA=2:1;3:1;4:1;5:1优化,获得转染效率。
4. 在室温条件下孵育转染试剂NanoEnter:DNA复合物5分钟,转染复合物即可制备完成。
★ 注意:NanoEnter Transfection Reagent可与DNA分子快速形成复合物,通常5分钟孵育时间即可完成。某些情况下(如特殊细胞类型及稀释比率等),需要延长孵育时间,长为20分钟,根据您的特殊细胞系类型及稀释比率不同来优化孵育时间。
5. 取出细胞培养皿,无需弃去生长的培养基,将NanoEnter Transfection Reagent-DNA复合物逐滴加至细胞中。
★ 注意:NanoEnter Transfection Reagent对血清和抗生素耐受性高,含抗生素的培养基对转染效率影响不大。
6. 转染后,培养细胞18-72小时后对细胞进行鉴定或加入抗生素筛选稳定克隆。
★ 注意:不同细胞系对本转染试剂的敏感度不一样,如果有明显的细胞毒性等情况发生,请转染后4-6小时更换培养基。
不同培养皿中NanoEnter:DNA复合物的建议使用量
培养基 | 表面积 | 培养基体积 | 稀释液体积 | DNA量 | NanoEnter量(2:1比率) ) |
96孔板 | 0.3cm2 | 100µl | 10µl | 0.1µg | 0.2µl |
48孔板 | 1.0cm2 | 200µl | 30µl | 0.3µg | 0.6µl |
24孔板 | 1.9cm2 | 500µl | 50µl | 0.5µg | 1.0µl |
12孔板 | 3.8cm2 | 1ml | 100µl | 1µg | 2µl |
6孔板 | 9.4cm2 | 2ml | 200µl | 2µg | 4µl |
60mm培养皿 | 21cm2 | 5ml | 500µl | 5µg | 10µl |
10cm培养皿 | 55cm2 | 10ml | 1000µl | 10µg | 20µl |
注意:稀释液的体积根据质粒的量确定,浓度为 0.01µg/µl,低于此浓度会显著降低转染率。
保存条件:
常温运输,4℃保存, 有效期12月(不可冻融)。
常见问题:
问题 | 可能原因 | 建议 |
转染率低 | 非优化的NanoEnter与 DNA比率 | 不同细胞系,可按NanoEnter:DNA(N/P =2:1,3:1, 4:1, 5:1)的比率优化 |
细胞密度太高或太低 | 针对不同细胞系,确定密度;对多数细胞类型来说,一般70-90%汇合度为。 | |
NanoEnter:DNA复合物 形成不佳 | 在无血清培养基中制备复合物(如:Opti-MEM) | |
培养基中的抑制成分 | 某些培养基成分会降低转染效率 | |
细胞毒性高 | DNA纯度不高 | 使用高纯度、无菌、无污染的DNA经行转染 |
对于细胞来说,转染复 合物过多 | 增加培养板中细胞数量,或降低复合物的含量 | |
转染蛋白具有细胞毒性 | 避免表达的蛋白可能对细胞的毒性 |
原创作者:上海尚宝生物科技有限公司