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上海尚宝生物科技有限公司 主营产品:生物专业领域内的技术研究,健身器材,日用百货,生物实验仪器

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技术文章

谷氨酸(Glu)含量检测试剂盒(微量法)

点击次数:20 发布时间:2024/9/23 10:39:58

 谷氨酸(Glu)含量检测试剂盒(微量法)

 

产品货号:BA1126

 

产品规格:100/96

 

产品简介:

Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的20种氨基酸,而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源。此外,Glu还是味精的主要有效成分,常用做食品添加剂以及香料生产。

谷氨酸脱氢酶(GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADHNH4+,引起340nm处吸光度的上升,通过测定340nm吸光度的变化,计算谷氨酸含量。

注意:实验之建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

 

产品内容:

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体60mL×2

2-8

试剂二

液体2mL×1

2-8

试剂三

粉剂×1

-20

试剂四

粉剂×1

-20

标准液

液体0.5mL×1

2-8

溶液的配制:

1. 试剂三:临用加入20mL试剂一;

2. 试剂四:临用加入1.5mL试剂二;

3. 标准液:10μmol/mL谷氨酸标准品。

 

技术指标:

检出限:0.0037μmol/mL

线性范围:0.0125-0.2μmol/mL

 

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96UV板、研钵、冰、蒸馏水。

 

操作步骤

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

细菌、细胞或组织样品:收集细胞或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次),10000rpm,常温离心10min,取上清待测。

称取约0.1g组织,加入1mL试剂一进行冰浴匀浆,10000rpm,常温离心10min,取上清待测。

 

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2. 标准溶液的制备 :将标准品分别稀释为0.20.10.050.0250.0125μmol/mL的标准溶液。

3. 在有盖EP管中加入下列试剂:

1)标准管:在微量石英比色皿/96UV板中加入40μL标准溶液、160μL试剂三和10μL试剂四混匀,立即记录 340nm20s时的吸光值为A15min20s时的吸光值A2,计算∆A=A2-A1

2)测定管:在微量石英比色皿/96UV板中加入40μL样本、160μL试剂三和10μL试剂四混匀,立即记录340nm 20s时的吸光值为A15min20s时的吸光值A2,计算∆A=A2-A1

三、谷氨酸含量计算:

1. 标准曲线的绘制:

以谷氨酸含量(µmol/mL)为x轴,标准管∆Ay轴,绘制标准曲线y=kx+b。将测定管∆A带入方程得到x值(µmol/mL)。

2. 氨基酸含量计算:

1)按照蛋白浓度计算谷氨酸含量(µmol/mg=x×V样本÷Cpr×V样本)=x÷Cpr

2)按照样品鲜重计算谷氨酸含量(µmol/g 质量=x×V样本÷W÷V样总×V样本)=x÷W

3)按照细菌或细胞数量计算谷氨酸含量(μmol/104 cell)=x×V样本÷1000÷V样总×V样本)=0.001x

V样总:加入提取液体积,1mLV样本:加入的样本体积,0.04mLCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本鲜重,g1000:细菌或细胞总数,1000万。 

 

注意事项:

如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

 

 谷氨酸(Glu)含量检测试剂盒(微量法)

 

产品货号:BA1126

 

产品规格:100/96

 

产品简介:

Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的20种氨基酸,而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源。此外,Glu还是味精的主要有效成分,常用做食品添加剂以及香料生产。

谷氨酸脱氢酶(GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADHNH4+,引起340nm处吸光度的上升,通过测定340nm吸光度的变化,计算谷氨酸含量。

注意:实验之建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

 

产品内容:

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体60mL×2

2-8

试剂二

液体2mL×1

2-8

试剂三

粉剂×1

-20

试剂四

粉剂×1

-20

标准液

液体0.5mL×1

2-8

溶液的配制:

1. 试剂三:临用加入20mL试剂一;

2. 试剂四:临用加入1.5mL试剂二;

3. 标准液:10μmol/mL谷氨酸标准品。

 

技术指标:

检出限:0.0037μmol/mL

线性范围:0.0125-0.2μmol/mL

 

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96UV板、研钵、冰、蒸馏水。

 

操作步骤

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

细菌、细胞或组织样品:收集细胞或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次),10000rpm,常温离心10min,取上清待测。

称取约0.1g组织,加入1mL试剂一进行冰浴匀浆,10000rpm,常温离心10min,取上清待测。

 

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2. 标准溶液的制备 :将标准品分别稀释为0.20.10.050.0250.0125μmol/mL的标准溶液。

3. 在有盖EP管中加入下列试剂:

1)标准管:在微量石英比色皿/96UV板中加入40μL标准溶液、160μL试剂三和10μL试剂四混匀,立即记录 340nm20s时的吸光值为A15min20s时的吸光值A2,计算∆A=A2-A1

2)测定管:在微量石英比色皿/96UV板中加入40μL样本、160μL试剂三和10μL试剂四混匀,立即记录340nm 20s时的吸光值为A15min20s时的吸光值A2,计算∆A=A2-A1

三、谷氨酸含量计算:

1. 标准曲线的绘制:

以谷氨酸含量(µmol/mL)为x轴,标准管∆Ay轴,绘制标准曲线y=kx+b。将测定管∆A带入方程得到x值(µmol/mL)。

2. 氨基酸含量计算:

1)按照蛋白浓度计算谷氨酸含量(µmol/mg=x×V样本÷Cpr×V样本)=x÷Cpr

2)按照样品鲜重计算谷氨酸含量(µmol/g 质量=x×V样本÷W÷V样总×V样本)=x÷W

3)按照细菌或细胞数量计算谷氨酸含量(μmol/104 cell)=x×V样本÷1000÷V样总×V样本)=0.001x

V样总:加入提取液体积,1mLV样本:加入的样本体积,0.04mLCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本鲜重,g1000:细菌或细胞总数,1000万。 

 

注意事项:

如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

 

 

原创作者:上海尚宝生物科技有限公司

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