荧光/光吸收法过氧化氢定量试剂盒产品货号：26310 产品规格：100 次/500 次 产品简介： 本试剂盒用于定量分析细胞及酶水平的过氧化氢含量。 在过氧化物酶的存在下，Reagent A 能够与过氧化氢以 1：1 的比例反应，生成物有红色荧光，该荧光可在激发光 571nm，发射光 585nm 处被监测（激发光亦可用 530-571nm 波长激发，发射光可用580-590nm监测）。本试剂盒低检测限为 50nM 过氧化氢。 包装清单: 产品信息 100 次包装 500 次包装 储存条件Reagent A 0.05ml 0.25ml -20℃Reagent B 0.05ml 0.25ml -20℃10×Reaction Buffer 1.2ml 6ml 室温10×KRPG Buffer 3.5ml 7ml 室温操作步骤： 1. 普通样品过氧化氢含量测定: 2. 用超纯水将 10×Reaction Buffer 稀释为 1×Reaction Buffer。 3. 于 96 孔板中每孔加入 94μl 1×Reaction Buffer。 4. 于 96 孔板中加入 5μl 样品，不足 5μl 的用 1×Reaction Buffer 补足 5μl。5. 于 96 孔板中加入 0.5μl Reagent A，0.5μl Reagent B。 6. 37℃避光孵育 5min。 7. 用酶标仪激发光 571nm，发射光 585nm 检测（激发光亦可用 530-571nm 波长激发，发射光可用580-590nm监测），分析数据。 8. 可选：除步骤 6 所示荧光检测，亦可在 560nm 处检测吸光度以用于数据分析。9. 背景扣除：除待测样品孔，需做空白孔（用 5μl 1×Reaction Buffer 代替样品）检测背景值。细胞内过氧化氢含量测定： 1. Reaction mixture 制备：每个样品准备 100μLReaction mixture。包含：0.5μl Reagent A，0.5μl Reagent B，10μl 10×KRPG Buffer，89μl 超纯水。根据实验样品数，准备适量 Reaction mixture。2. 将 100μl Reaction mixture 加入 96 孔板中，37℃避光孵育 5min 备用。 3. 细胞样品制备：准备收集约 1.5×10 4个细胞于 1.5ml 离心管中，PBS 清洗后3000rpm离心5min，4. 弃上清。 5. 加入 20μL KRPG buffer 悬浮的细胞（约 1.5×10 4个细胞）于步骤 2 的 96 孔板中，37℃避光孵育10min。如需空白对照，以 20μL KRPG buffer 代替细胞，作为空白对照孔。 6. 用酶标仪激发光 571nm，发射光 585nm 检测（激发光亦可用 530-571nm 波长激发，发射光可用580-590nm监测），分析数据。 7. 可选：除步骤 5 所示荧光检测，亦可在 560nm 处检测吸光度以用于数据分析。注意事项 ： 1. Reagent A 和 Reagent B 为光敏试剂，请避光保存。 2. 待测样品中，DTT 或β巯基乙醇浓度不得高于 10μM。 3. 待测样品 pH 值需小于 8.5。 4. 建议每次使用用过氧化氢做标准曲线。