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技术文章
植物组织果糖含量检测试剂盒(微量法)
点击次数:32 发布时间:2022/8/16 11:16:28
产品货号:BA1514 产品规格:100管/96样 产品简介: 果糖是一种为常见的己酮糖,是葡萄糖的同分异构体,以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中,能与 葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是甜的单糖,广泛应用于食品、医药、保健品生产中。 在酸性条件下果糖与间苯二酚反应,生成有色物质,在480nm下有特征吸收峰。 技术指标: 检出限:0.065mg/mL 线性范围:0.5-35mg/mL 注意:实验之建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。 产品内容: 试剂名称 规格 保存条件 提取液 液体110mL×1瓶 2-8℃ 试剂一 粉剂×1支 2-8℃ 试剂二 液体25mL×1瓶 2-8℃ 试剂三 液体6mL×1瓶 2-8℃ 试剂四 粉剂0.5g×1瓶 室温 溶液的配制: 试剂一:10mg果糖,临用加1mL蒸馏水溶解,再用蒸馏水稀释为4mg/mL的果糖标准液。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水。 操作步骤: 一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 称取约0.05g样本,常温研碎;加入0.5mL提取液,适当研磨后快速转移到有盖离心管中;置于80℃水浴锅中 10min(盖紧,以防止水分散失),振荡3~5次,冷却后,4000g,常温离心10min,取上清;加入少量(约2mg) 试剂四,80℃脱色30min(盖紧,以防止水分散失);再加入0.5mL提取液,4000g,常温离心10min,取上清液测定。 二、测定步骤 1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至480nm,蒸馏水调零。 2. 样本测定(在1.5mL EP管中依次加入下列试剂): 试剂(μL) 空白管 标准管 测定管 样本 - - 30 试剂一 - 30 - 蒸馏水 30 - - 试剂二 210 210 210 试剂三 60 60 60 混匀,80℃水浴反应10min(盖紧,以防止水分散失),冷却后取200μL至微量玻璃比色皿或96孔板中测定 480nm处光吸收值,记为A空白管、A标准管、A测定管,并计算ΔA测定=A 测定管-A空白管、ΔA标准=A标准管-A空白管。 二、果糖含量计算: 1. 按样本蛋白浓度计算 果糖含量(mg/mg prot)=C标×ΔA测定÷ΔA标准×V样总÷(Cpr×V样总)=4×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr 2. 按样本质量计算 果糖含量(mg/g 质量)=C标×ΔA测定÷ΔA标准×V样总÷W=4×ΔA测定÷ΔA标准÷W C标准管:标准管浓度,4mg/mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样 本质量,g。 注意事项: 如果样本吸光值大于1.1,建议将样本用提取液稀释后进行测定
原创作者:上海尚宝生物科技有限公司