植物中脂氧合酶（LOX）活性检测试剂盒（紫外分光光度法）产品货号：BA1499

产品规格：50管/48样

产品简介：

LOX广泛存在于植物组织中，特别是黄豆种子中。LOX催化不饱和脂肪酸氧化反应，导致膜脂过氧化。在植物的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。

LOX催化亚油酸氧化，氧化产物在234nm处有特征吸收峰；测定234nm吸光度增加速率，来计算LOX活性。

注意：实验之建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

产品内容：

溶液的配制：

1. 提取液：含不溶性物质，使用混匀即可。

2. 试剂二：临用加入5mL试剂一，充分溶解，滴加0.1mL 0.2 mol/L NaOH至溶液澄清。

需自备的仪器和用品：

研钵/匀浆器、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约0.1g样本，加提取液1mL，冰上充分研磨，16000g 4℃离心20min，取上清液置冰上待测。

二、测定操作表： 

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长到234nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一在25℃水浴中预热30min以上。

3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸馏水、800μL试剂一和100μL试剂二，迅速混匀后于234nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A1和A2。

4. 测定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、800μL试剂一和100μL试剂二，迅速混匀后于234nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A3和A4。

三、LOX活性计算

1. 按蛋白浓度计算

活性单位定义：在1mL体系下，25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.001个单位为一个酶活单位。

LOX (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]÷0.001÷(Cpr×V样)÷T×V反总=10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr

2. 按样本质量计算

活性单位定义：在1mL体系下，25℃中每克样本每分钟催化吸光值变化0.001个单位为一个酶活单位。

LOX (U/g 质量) = [(A4-A3)-(A2-A1)]÷0.001÷(V样÷V样总×W)÷T×V反总=10000×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷W

Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，（需另外测定）；W：样本质量，g；V样：加入反应体系中上清液体积， 100μL=0.1mL；V样总：上清液总体积，1mL；T：反应时间，1min；V反总：反应体系总体积，1mL。

注意事项： 

1. 试剂二易自发氧化，从而导致空白管测定值偏高，必须临用配制。

2. 样本处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日完成酶活性测定。

3. 正式实验做1~2个预实验，证∆A的值在0.02~1.2范围内；若反应后为明显的悬浊液，则需稀释后再测。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司