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技术文章
植物总酚含量检测试剂盒
点击次数:25 发布时间:2022/9/5 11:02:07
产品货号:BA1798 产品规格:120T 产品简介: 酚类物质是植物体中重要的次生物质,对植物生长发育有一定的调节作用,能够清除自由基起到抗氧化的作用,并具有较高的营养价值和医疗保健作用,同时在植物抗病、基因的诱导表达和生物固氮等方面也具有重要作用,在化妆品、食品和医药等域具有广泛应用。酚类物质在碱性条件下能够将钨钼酸还原生成蓝色化合物,产物在760nm处具有特征吸收峰,通过吸光值的变化即可定量检测植物中总酚的含量。 产品组成: 名称 规格 保存条件 使用说明及注意事项 提取液 液体120mLx1瓶 4℃ - 试剂一 液体5mLx1瓶 4℃ 避光 具有刺激性,操作时请做好防护措施 试剂二 液体8mLx1瓶 4℃ - 标准品 粉剂x1支 (5mg没食子酸标准品) 4℃ 避光 使用加入1mL蒸馏水充分溶解 (可50℃加热促溶,即为5mg/mL没食子酸标准液) 标准稀释液的制备:将5mg/mL没食子酸标准液使用蒸馏水稀释至0.3、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125mg/mL即为标准稀释液。 序号 A 1 2 3 4 5 6 稀释浓度(mg/mL) 5.0 1.0 1.0 1.0 0.1 0.05 0.025 标准液体积(μL) 100 150 100 50 200 200 200 蒸馏水体积(μL) 400 350 400 450 200 200 200 稀释后浓度(mg/mL) 1.0 0.3 0.2 0.1 0.05 0.025 0.0125 操作步骤(仅供参考): 1. 植物总酚的提取(可根据预实验结果适当调整样本量及比例):植物样本烘干至恒重,粉碎后过30-50目筛;称取约100mg粉碎样本,加入2mL提取液,超声提取(60℃,功率300W,超声5s,间歇8s,总时间30min),12000rpm常温离心10 min,取上清即为待测样本。 2. 测定步骤:①分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至760nm,蒸馏水调零。 ②在96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列试剂: 试剂 测定组(μL) 对照组(μL) 标准组(μL) 空白组(μL) 待测样本 10 10 - - 标准稀释液 - - 10 - 蒸馏水 - - - 10 试剂一 50 - 50 50 充分混匀,25℃静置2min 试剂二 50 50 50 50 蒸馏水 90 140 90 90 充分混匀,25℃静置10min 吸光值测定:测定760nm处吸光值,记为A测定、A对照、A标准和A空白;计算∆A测定=A测定-A对照,∆A标准=A标准-A空白。注:每个测定组均需设一个对照组,空白组只需测定1-2次。 标准曲线的建立:以0.3、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125mg/mL为横坐标(x),以其对应的∆A标准为纵坐标(y),绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将∆A测定带入公式中得到x(mg/mL)。 3. 植物总酚含量计算 ①按植物样本蛋白浓度计算 总酚含量(mg/mg prot)= x×V提取/(Cpr×V提取)=x/Cpr ②按植物样本质量计算 总酚含量(mg/g)=x×V提取/W=2×x/W 注释:V提:提取液总体积,2mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样品质量,g。 注意事项: 1. 若测定吸光值超出标准吸光值线性范围,建议适当增加样本量或将待测样本适当稀释后再进行测定,计算时相应修改。 2. 为结果准确且避免试剂损失,测定请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准),确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定。
原创作者:上海尚宝生物科技有限公司