产品货号：BA1781

产品规格：50T/100T

产品简介：

动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。丙二醛(Malondialdehyde, MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物，一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列包括 MDA在内的复杂化合物，此时通过检测 MDA的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA的测定被广泛用作脂质氧化的指标。生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA，例如thromboxane synthase也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。

植物丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)(Plant MDA Assay Kit with TBA)又称脂质氧化(MDA)检测试剂盒，是采用一种基于MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，随后通过比色法用于对植物组织(根、茎、叶、种子等)MDA进行检测，是门用于植物脂质氧化(lipid peroxidation)水平检测的试剂盒，不适用于动物组织、细胞、血液等。丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA发生反应，形成红色的MDA-TBA加合物，MDA-TBA加合物在532nm处有吸收，该复合物的吸光系数为155mmol/(L.cm)，并且在 600nm波长处有小吸收。植物组织中糖类物质对MDA-TBA反应有干扰，我们总结出经验公式，以消除这一干扰。亦可以通过比标准品进行比较，进行含量检测。本试剂盒仅用于科研域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1. 植物根茎、叶子等

2. 剪刀

3. 离心管、小试管或96孔板

4. 分光光度计或酶标仪

5. 水浴锅或恒温箱

6. 离心机

操作步骤（仅供参考）：

1. 样本处理：

(1) 制备提取液：取适量的植物根、茎、叶子、种子等，称量后剪碎，按每0.4g植物样品加入4ml的比例加入组织匀浆液，充分匀浆(一般取0.4～1g植物样品即可)。4000g离心10min，取上清液待用，该上清液即为MDA提取液。如果采用酶标仪检测结果，应相应减少制备提取液的量，譬如取0.2g植物样品加入2ml组织匀浆液。

(2) 样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量植物样品的MDA含量。测定蛋白浓度非必须步骤，亦可采用经验公式计算。

本试剂盒对于样品中的常见化学成分的兼容性参考下表：

2. TBA工作液的配制：称取适量TBA，用组织匀浆液配制成浓度为0.68％的TBA工作液。例如取0.068g TBA用10ml组织匀浆液配制，终浓度即为0.68%的TBA工作液。TBA工作液需溶解后再使用，可以加热到60℃促溶，并可通过反复剧烈Vortex促溶。配制好的TBA工作液4℃避光保存，至少1个月内有效。

3. 稀释标准品：取适量标准品用组织匀浆液稀释至1、2、5、10、20、50μM；如果进行简易快速检测，标准品直接稀释10μM，配制好的MDA标准品4℃避光保存，至少3个月内有效。如果采用经验公式计算含量，无需标准品。

4. 样品测定:

(1) 分光光度计测定：在离心管或其它适当容器内加入1ml组织匀浆液作为空白对照，加入1ml提取液用于测定，随后加入1ml TBA工作液。可参考下表设置检测反应体系，依次加入试剂：

(2) 酶标仪测定：在离心管或其它适当容器内加入200μl组织匀浆液作为空白对照，加入1ml提取液用于测定，随后加入1ml TBA工作液。可参考下表设置检测反应体系，依次加入试剂：

(3) 混匀,加盖，95℃水浴煮沸30min，加热时务必注意避免液体暴沸溅出。如果使用加热块(Heat block)进行加热注意用重物压紧离心管盖；如果使用沸水浴，则需使用可把盖子锁死的离心管或螺旋盖离心管，或用Parafilm封住离心管口，用针头刺一小孔。方便和准确的加热方法是使用带有热盖并可以加热的金属浴或者0.5mlPCR仪。

(4) 水浴，冷却至室温，4000g离心10min。

5. 取上清，蒸馏水调零，用分光光度计或酶标仪检测532nm处吸光值，如果不方便测定532nm的吸光度，也可以测定530-540nm之间的吸光度。如果采用经验公式计算，应分别测定450nm、532nm、600nm出吸光度值。

计算：

对于MDA提取液直接根据标准曲线计算；如果进行简易快速检测，直接以10μM标准品进行计算，获得 MDA 的摩尔浓度；如果采用经验公式，无需制作标准曲线或测定标准品。对于固体状组织，可以通过单位重量的蛋白含量或组织重量等来表示初样品中的MDA含量，例如μmol/mg蛋白或μmol/mg组织。

简易快速MDA含量计算公式：

MDA含量(μmol/mg)=(OD测定-OD空白)/(OD标准-OD空白)×标准品浓度/提取物浓(g/ml)

不采用标准品的经验公式：

MDA浓度(μmol/L)=6.45×(OD532-OD600)-0.56×OD450

MDA含量(μmol/mg)=MDA 浓度(μmol/L)×提取液体积(ml)/植物组织鲜重(g)

OD532=待测样品的532nm处吸光度值

OD600=待测样品的600nm处吸光度值

OD450=待测样品的450nm处吸光度值

注意事项：

1. 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。

2. 待测提取液如不能及时测定，应置于-20℃保存，4天内稳定。

保存条件： 12个月有效。4℃运输，4℃保存。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司