（脾、肺、肾）（磁珠法）

产品货号：26223

产品规格：50T

产品简介：

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，可从样品中分离纯化高质量基因组DNA。特殊包被的磁珠在一定条件下对目的DNA具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的DNA，能够达到快速分离纯化DNA的目的。整个过程安全、便捷，提取的DNA纯度高。使用本试剂盒纯化的基因组DNA 的OD260/OD280均在1.7-1.9之间，可以应用于各类下游分子生物学实验。

使用请先在漂洗液中配置70%乙醇。若裂解液产生沉淀，使用应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min溶解沉淀，摇匀后使用。

产品组成：

操作步骤(仅供参考)：

1. 裂解

取适量的动物组织样本（脾脏≤20 mg；肺脏≤20 mg；肾脏≤20 mg；）用液氮研磨成粉末，并迅速转移到已加入480μl裂解液S1、150μl裂解液S2以及20μL蛋白酶K（20 mg/mL）的EP管中，吹打或震荡混合均匀。将EP管置于65℃水浴25～30min。待冷却到室温，12000rpm 4℃离心5-10min。

2. 结合

尽量取净上清于新的1.5 mLEP管中，加入等体积的异丙醇以及振荡混匀的50μL磁珠，颠倒混匀1min，静置3min。将EP管置于磁铁上进行磁分离，吸弃废液（吸净管盖及管底残液）。

3. 洗涤

加入600 μL漂洗液（使用请预先配置70%乙醇），轻柔混匀1-2 min，将EP管置于磁力架上进行磁分离，吸净管盖及管底的残液；重复本步骤一次。

4. 洗脱

室温晾干5～10 min至乙醇挥发，加入50～100 μL洗脱液，缓慢抽吸混匀，65℃水浴10 min。（每隔1～2 min轻摇EP管几下混匀）。将EP管置于磁力架上进行磁分离，小心吸取上清液至新的EP管中，进行下游实验。（判断磁珠晾干的标准：侧面观察磁珠无反光，正面观察磁珠边缘龟裂）

注意事项：

1. 动物组织（脾、肺、肾）要用液氮充分研磨。

2. 整个裂解过程操作尽量温和，并在要求时间内完成。

3. 如果组织液浓度较高，则建议磁珠量可适当增加，以获取高浓度DNA。

4. 客户自备试剂：异丙醇、无水乙醇、蛋白酶K。

5. 使用请在漂洗液瓶中预先配制70%乙醇。

6. 磁珠在使用一定要充分混匀。

有效期：磁珠可以在室温下（15-25℃）运输，但请在4℃冰箱中保存，禁止冻存。蛋白酶K需-20℃保存。其余试剂可以室温保存，更长时间的保存可置于2-8℃。复检期1年。

常见问题及参考意见：

1. 得率低

（1）组织没有裂解完，裂解时间不够或没有离心直接进行下一步操作：可适当延长裂解时间，长不超过60min。样品裂解后，请一定要离心后再进行下一步操作。

（2）结合不充分：结合过程中要使磁珠一直处于悬浮状态，并且充分颠倒混匀。

（3）取样量大于说明书给出量：取样量请严格按照说明书操作。

2. 条带弥散

（1）样品不新鲜或反复冻融多次：尽量用新鲜样品进行实验，如果样品需要保存，可根据实验，分装保存样品，尽量避免反复冻融；

（2）环境温度太高：可以将研钵置于-20℃预冷或置于液氮保存后再进行研磨，如果所提取材料基因组DNA易降解，可用液氮研磨；

（3）裂解时间太长：裂解时间不要超过60min；

（4）提取后模板DNA放置时间太长：提取后如有需要，请尽量及时进行凝胶电泳实验。短期内可置于4℃保存，为延长时间，请置于-20℃保存（尽量注意避免反复冻融）。

3. DNA液有颜色

（1）洗涤过程不充分：如果结合后磁珠呈团状、 丝状或颗粒状，可增加点阵力度及次数，充分吹打混匀。

（2）裂解不充分：适当增加裂解液S1和S2用量，也可以延长裂解时间。

（3）样品用量大于说明书给出量而其他试剂用量没有相应调整：严格按照说明书操作，如果需要增大样本量，可以等比例增加裂解液S1、S2以及磁珠用量，其他试剂用量不变。

4. DNA样品不纯，干扰后续实验

（1）DNA液有乙醇残留：洗涤时，请注意吸净管盖及管底的残液。此外，磁珠应干燥，无乙醇残留。

（2）磁珠洗涤不充分：加入70%乙醇溶液时，请吸打或点阵混匀。如有必要，可增加一次洗涤步骤。

（3）DNA液中吸入磁珠：如果不小心吸入磁珠，请将上清液返回原管，待磁珠吸附至管壁后重新吸取上清。或者将吸取的上清液10000rpm离心2min，再取上清。

（4）DNA液中含有蛋白质等杂质：建议适当减少样品用量。或可重复一次提取过程去除杂质。

（5）DNA液中含有轻微盐离子等杂质，此为洗脱液（含有抑制核酸降解的成分）正常现象，不影响下游实验。如有特殊需要，可使用等量的经高压灭菌的去离子水作为洗脱液。为方便实验，可将获得的DNA置于-20℃环境分装保存。

原创作者：上海尚宝生物科技有限公司